Desenvolvimento de ensaio de detecção de lactato como marcador de transformação tumoral e busca de extratos de plantas com ação anti-cancerosa através de técnicas de High Throughput e High Content Screening

Resumo

Células tumorais são expostas à vários nutrientes simultaneamente, mas é o consumo intensivo de glicose e glutamina, o aminoácido mais abundante do plasma sanguíneo, um dos marcos da transformação tumoral. A captação e metabolismo expressivos de glicose com secreção de lactato mesmo na presença de oxigênio, conhecido como glicólise aeróbica ou efeito Warburg, assim como o aumento dos níveis de glutaminólise nas células cancerosas, se correlacionam com suas altas demandas energéticas e biossintéticas. A busca de inibidores tumorais tendo como alvos proteínas das vias glicolíticas e glutaminolíticas tem aberto uma nova frente de combate ao câncer, com a promessa de eficácia e amplitude de ação dado que se baseiam em um elemento comum às células transformadas: a reprogramação de seu metabolismo para a atividade biosintética. Terapia com compostos anti-glicolíticos e anti-glutaminolíticos tem o potencial de, além de individualmente combater a proliferação celular e induzir apoptose, agir na redução de resistência de tumores induzidas por hipóxia, potencializar seus efeitos citotóxicos com o de outros medicamentos já empregados, aumentar a seletividade dos mesmos e reduzir o fenótipo de resistência múltipla de drogas dependente de ATP. Este projeto tem como objetivo a adequação de um bioensaio para a busca de inibidores de vias metabólicas como plataforma para triagem de anti-tumorais. O bioensaio envolverá a detecção de lactato secretado por células cancerosas o qual servirá como marcador dos níveis de atividade glicolítica e glutaminolítica. Diferentes linhagens celulares tumorais serão avaliadas por técnicas de High Throughput Screening (HTS), aplicando-se o bioensaio desenvolvido para a triagem de extratos naturais com ação inibitória. Por fim, técnicas de High Content Analysis (HCA) serão empregadas para caracterizar o efeito dos extratos promissores sobre as células tumorais e seus relativos não transformados, tais como citotoxicidade, interrupção do ciclo celular, apoptose entre outros.