Prospecção, clonagem e expressão de genes de Burkholderia sp. com potencial para o controle de fitopatógenos

Resumo

O gênero Burkholderia é composto por bactérias Gram-negativas, que apresentam uma elevada diversidade fisiológica e genética. As bactérias pertencentes a este gênero estão sendo objeto de estudos e tem sido amplamente utilizadas para uma série de aplicações biotecnológicas, como agentes de biocontrole, promotores de crescimento vegetal, bioremediação / biodegradação e como produtor de importantes moléculas de interesse na medicina, agricultura e indústria. Em projeto anterior (Proc. FAPESP no.2008/52407-9), uma biblioteca de mutantes foi gerada a partir de Burkholderia cenocepacea linhagem TC3.4.2R3. Esta bactéria foi isolada endofiticamente a partir de raízes de cana de açúcar (Proc. FAPESP 2002/14143-3), e neste projeto foi observado que este isolado apresenta a capacidade de controlar fungos e bactérias patogênicas, bem como produzir antibióticos. Alguns mutantes, defectivos no controle destes patógenos e não produtores de antibióticos foram caracterizados mostrando que sequências similares aos genes da piocina, patatina, enzimas de modificação e fatores de transcrição estão relacionados com a atividade antimicrobiana e respostas de defesa em plantas. Assim, este projeto visa contribuir para um melhor entendimento do envolvimento desses genes de B. cenocepacea em diversos processos biológicos relacionados ao controle de doenças microbianas em plantas e síntese de moléculas de bioativas. Para isso, o DNA que franqueia o Tn5 (que inativou os genes) serão seqüenciados, ORFs putativas serão identificadas, clonadas e os genes expressos em vetores específicos. As proteínas serão purificadas e parcialmente caracterizadas. Estas moléculas e genes, se melhor caracterizados, poderiam contribuir para o desenvolvimento estratégias e produtos aplicáveis em diferentes áreas como a síntese de biomoléculas, geração de microrganismos recombinantes, plantas geneticamente modificadas, entre outras aplicações.