Papel das acetilacoes no processo de reparo de quebras de dupla fita de dna no trypanosoma cruzi.

Resumo

O reparo de DNA é um processo constante e essencial para a sobrevivência das células atuando em resposta aos diferentes danos causados no DNA. Os mecanismos existentes e conhecidos de reparo do DNA lesado são diversos e provavelmente universais, contudo em tripanosomatídeos esses mecanismos ainda não foram bem esclarecidos. Dados recentes de nosso laboratório em colaboração com o laboratório do prof. Dr. Carlos Renato Machado demonstraram a importância da proteína Rad51 no reparo de quebra da dupla fita do DNA de Trypanosoma cruzi. Muitos processos celulares são controlados por modificações pós-traducionais das histonas (acetilação, metilação, fosiorilação, ubiquitação e ADP-ribosilação). Dados do nosso laboratório apontam a influência das acetilações de histona H4 no reparo do DNA de tripanosomatídeos. Neste projeto de doutorado procuraremos entender melhor o papel das modificações pós-traducionais de histona H4, mais especificamente as acetilações, no reparo ao dano no DNA e a relação entre estas modificações e a proteína de reparo Rad51 no parasita T. cruzi. Para isto propomos nesse projeto: 1. Confirmar os dados de que as acetilações nas lisinas K4 K10 e K14 de histona H4 afetam o reparo do dano ao DNA de T. cruzi gerado por agentes genotóxicos; 2. Avaliar a distribuição nuclear da histona H4 contendo mutações nas lisinas acetiladas em relação a parasitas que superexpressão a histona selvagem antes e após o tratamento com radiação ionização; 3. Analisara colocalização da proteína Rad51 com as diferentes histonas anti-H4 acetilada; 4. Estudara utoaestrutura da cromatina de T. cruzi nos mutantes da histona H4 antes e após o dano no DNA através de técnicas de crio fixação e microscopia eletrônica de transmissão; 5. Gerar modelos tridimensionais e ilustrações das conclusões extraídas deste trabalho com objetivo de facilitar o entendimento das observações realizadas. (AU)