Proteínas quinases e fosforilação de eIF2 envolvidas no crescimento e diferenciação de Trypanosoma cruzi

Resumo

O início da síntese protéica em eucariotos é regulado por proteínas quinases que são ativadas em resposta a diferentes tipos de condições ambientais. Em mamíferos estão descritas quatro proteínas quinases capazes de fosforilar o fator de iniciação 2 (elF2) em resposta a alterações na concentração de aminoácidos, presença de DNA dupla fita, estresse de retículo endoplasmático e ausência de heme (Wek et al., 2006a). A fosforização de uma única serina da cadeia α de eiF2 leva a uma diminuição do início da síntese protéica e a expressão de fatores que permitem à célula contrabalançar estes estresses. Em nosso laboratório evidenciamos três proteínas quinases com características para fosforilar eiF2α em Trypanosoma brucei, o protozoário causador da doença do sono. Uma delas, a TbeiF2-K2 que está localizada na membrana da bolsa flagelar e em vesículas endocíticas do parasita (Moraes et al., 2007). Anticorpos específicos contra está quinase reconhecem organelas denominadas reservossomos das formas epimastigotas de Trypanosoma cruzi o parasita causador da Doença de Chagas. Dados preliminares apontam que os aminoácidos serina 43 e treonina 169 da subunidade a do fator elF2 são fosforilados. A Thr 169 é fosforilada na indução da diferenciação por carência nutricional de formas epimastigotas em formas infectivas e irradiação gamma que causa parada no crescimento do parasita. A serina 43 é diminuída por estresses oxidativos como adição de H2O2 e arsenito de sódio. Neste projeto avaliar o papel destas quinases e da fosforilação de elF2α no crescimento e diferenciação do T. cruzi. Para isto pretendemos avaliar o papel das [...] quinases em T. cruzi e a fosforilação do fator elF2α no crescimento, além de analisar a expressão das quinases nas diferentes formas do T. cruzi e durante a metaciclogênese usando: RT-PCR, anticorpos específicos contra estas quinases (anti-peptídeos sintéticos e proteínas recombinantes). (AU)