Efeito da inibição de N-glicosilação sobre o perfil transcricional e proteômico de Paracoccidioides brasiliensis

Resumo

Paracoccidioides brasiliensis é o agente etiológico da paracoccidioidomicose, a micose profunda de maior prevalência na América Latina. Dentre os fatores próprios do fungo capazes de aumentar sua patogenicidade são mencionados lipídios, polissacarídeos e glicoproteínas. A glicosilação é importante para a secreção protéica, função, estabilidade e imunogenicidade. Glicanas N-ligadas a proteínas têm sido caracterizadas em diferentes espécies, de mamíferos a leveduras. Em leveduras de P. brasiliensis, N-glicanas exercem importante papel na atividade de N-acetil-²-D-glicosaminidase (NAGase) produzida, e estão diretamente envolvidas no crescimento e morfogênese fúngico. Exercem ainda considerável influência sobre a regulação da expressão de NAGase, a e ²-1,3-glucanase, a-1,4-amilase, bem como de outras enzimas relacionadas a biossíntese/degradação da parede celular de P. brasiliensis. O fato de N-glicanas influenciarem atividades biológicas de proteínas de P. brasiliensis, motiva-nos a investigar, de maneira mais global, os efeitos da inibição da N-glicosilação sobre o transcriptoma e proteoma de leveduras. Para tanto, propomo-nos a cumprir as seguintes metas: (1) avaliar o efeito da inibição de N-glicosilação (proporcionada pelo uso de tunicamicina) sobre o perfil transcricional de P. brasiliensis, por HSS (Hibridização Subtrativa Suprimida); (2) validar os genes diferencialmente expressos por PCR em tempo real (RT-qPCR); (3) avaliar o efeito da inibição de N-glicosilação sobre o perfil proteômico de P. brasiliensis, por 2D-DIGE (Bidimensional - Differential Gel Electrophoresis). Nossa expectativa é de que o cumprimento dessas metas permita que se investigue a existência de associação direta entre o processo de N-glicosilação com genes e proteínas relevantes para o crescimento, a morfogênese e a patogenicidade de P. brasiliensis. (AU)