Estudos moleculares do operon imuAB dnaE2 de Caulobacter crescentus

Resumo

A resposta SOS é um mecanismo de resposta a estresse celular em bactérias, regulada pelas proteínas LexA e RecA. Esse mecanismo está diretamente relacionado com a mutagênese e a evolução em procariontes. Esse aspecto mutagênico da resposta SOS é devido à presença de DNA polimerases propensas a erros. Essas DNA polimerases ajudam a célula a tolerar lesões através do processo de síntese translesão (TLS), porém podem induzir mutações na célula. O microrganismo em foco neste trabalho é a alfa-proteobactéria Caulobacter crescentus. Essa bactéria possui um operon (imuABdnaE2) que possui função semelhante à DNA polimerase V de E. coli (operon umuDC). Tal operon está presente em vários genomas bacterianos, mas seu funcionamento ainda é pouco compreendido. Nossos principais objetivos serão avaliar se a mutagênese mediada por imuAB dnaE2 em C. crescentus possui um componente "untargeted" (isto é, se pode ocorrer mesmo na ausência de danos no DNA), e avaliar se a proteína ImuA, que possui similaridade com RecA, desempenha algum papel na indução da resposta SOS. Para atingir o primeiro objetivo, construímos cepas de C. crescentus contendo mutações no promotor de imuA que o tornam constitutivo (operador constitutivo, oc). Neste projeto, confirmaremos a expressão constitutiva dos genes imuAB dnaE2 nestas cepas, e estas serão usadas em ensaios de medição das taxas de mutação espontânea. O papel da proteína ImuA na indução da resposta SOS será avaliado através da medição da expressão de promotores SOS em fusão transcricional com o gene lacZ, tanto na cepa selvagem quanto na cepa imuA.