Utilização de PCR em tempo real quantitativo para diagnóstico diferencial entre Salmonella enterica subesp. enterica sorovares enteritidis, Typhimurium e Gallinarum (biovares Gallinarum e Pullorum) em aves domésticas (Gallus Gallus)

Resumo

O objetivo dessa pesquisa é aplicação da técnica da PCR em tempo real para diagnóstico indireto e quantificação da carga bacteriana em órgãos e fezes de aves comerciais experimentalmente infectadas por Salmonella enterica subesp. enterica sorovares enteritidis (SE), Typhimurium (STM) e Gallinarum (biovares Gallinarum e Pullorum), em diferentes momentos pós-infecção. Serão conduzidos 2 experimentos (in vitro e in vivo). As análises in vitro serão realizadas para diagnóstico diferencial e detecção específica de cada estirpe bacteriana (SE, STM, SG e SP), utilizando 3 diferentes misturas para cada bactéria. O primeiro tratamento consistirá de uma mistura das 4 estirpes bacterianas como amostra teste. No segundo, utilizar-se-á uma mistura de 3 estirpes bacterianas, excluindo a bactéria de interesse, como amostra controle negativo e no terceiro, como reação controle positivo, será utilizado somente a estirpe bacteriana de interesse. Para o experimento in vivo, serão utilizadas 36 aves para postura de linhagem comercial branca, divididas em 6 grupos (n=6). No grupo A, as aves não serão infectadas e serão mantidas como controle negativo. As aves dos grupos B, C, D e E, serão infectadas com SE, STM, SG e SP, respectivamente. No grupo F, as aves serão infectadas com um inóculo contendo as quatro estirpes bacterianas. Os inóculos serão administrados por via oral, no primeiro dia de vida das aves. Às 24h e às 72h após o desafio, 3 aves de cada grupo serão eutanasiadas para a colheita de amostras de baço e fezes, para extração de DNA bacteriano e quantificação bacteriana através da técnica da PCR em tempo real. Os resultados obtidos serão comparados pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. (AU)