Participação dos circuitos glutamatérgicos, endocanabinoides e endovaniloides do córtex pré-frontal medial no modelo de dor neuropática e da investigação das comorbidades dor crônica e outras desordens neurológicas

Resumo

A proposta do presente trabalho será investigar a atividade neuronial do córtex pré-frontal medial (CPFM) e dos núcleos do sistema endógeno de modulação de dor, tais como substância cinzenta periaquedutal (SCP), núcleo magno da rafe (NMgR) e locus coeruleus (LC), através da detecção da proteína c-Fos, seguido por reações imuno-histoquímicas para a identificação de neurônios positivos para receptores glutamatérgicos do tipo NMDA, endocanabinoide do tipo CB1 e receptores vaniloides de potencial transitório do tipo 1 (TRPV1), analisando a atividade neuromolecular no 7º, 14º e 21º e no 28º dia após a injúria por constrição crônica do nervo isquiático (CCNI) no modelo de dor neuropática (DN) crônica. Adicionalmente, após 28 dias da indução da DN, as áreas centrais já mencionadas serão isoladas para observarmos se a dor crônica (DC) aumenta a expressão dos receptores NMDA, CB1 e TRPV1, através do Western Blotting. Além disso, para verificar se o aumento da quantidade de proteína para receptores presentemente estudados também é acompanhado por aumento de RNAm nos tecidos do CPFM, SCP, NMgR e LC serão utilizados experimentos de PCR em tempo real. Também será realizada a neuroestimulação do CPFM através da técnica de estimulação encefálica profunda [deep brain stimulation (DBS)] avaliando-se seu efeito sobre a DN, além de registrar a atividade neuronial de núcleos do sistema endógeno que modulam a dor. O teste nociceptivo que será utilizado é o de alodínia mecânica de von Frey, com o qual avaliar-se-á a resposta nociceptiva de animais com DN no 7º, 14º e 21º e no 28º dia após a CCNI. O próximo passo será investigar o envolvimento dos sistemas glutamatérgico, endovaniloide e endocanabinoide, assim como a interação farmacológica entre os sistemas endocanabinoide e glutamatérgico e entre os sistemas endocanabinoide e endovaniloide no CPFM através do pré-tratamento com antagonistas e agonistas seletivos. E por fim, serão investigadas as comorbidades entre a DC e outras desordens neurológicas, tais como a depressão e ansiedade/pânico em roedores com DC, através da utilização de modelos animais de depressão e ansiedade e pânico em animais após 21 dias da CCNI. As técnicas de neuroestimulação (DBS) e as mesmas ferramentas farmacológicas já propostas (visando estudar a interação entre os sistemas farmacológicos de interesse) também serão utilizadas no estudo da comorbidade em um modelo experimental de dor crônica induzida por constrição crônica do nervo isquiático em ratos Wistar.