Estudo da RNA helicase da família DEAD-box codificada pelo gene CC0835 em Caulobacter crescentus

Resumo

Caulobacter crescentus é uma bactéria gram-negativa não patogênica e de vida livre, presente principalmente em ambientes aquáticos, e tem sido utilizado como um importante sistema modelo para o estudo do ciclo celular, uma vez que suas células possuem a característica de se dividir em duas células-filhas distintas. Seu ciclo de vida complexo aliado a forma de controle gênico desenvolvido pela espécie para adaptar-se às condições ambientais, a tornam um modelo excelente para estudos de genes relacionados a mecanismos de respostas a estresses ambientais. Em baixas temperaturas, é energeticamente favorável a formação de estruturas secundárias no RNA, comprometendo gravemente suas funções e, consequentemente, os processos celulares em que participa. Neste momento é essencial a expressão de proteínas especializadas, como proteínas de choque frio, helicases e chaperones de RNA, que ajudam a ajustar a célula à nova condição ambiental. A RNA helicase da família DEAD-box codificada pelo gene CC0835 merece atenção, uma vez que mutantes apresentam fitness reduzido a 30°C e alta sensibilidade ao frio, sugerindo um papel celular importante, e ainda desconhecido. Este projeto propõe construir uma linhagem onde a proteína será adicionada de um epitopo reconhecido por anticorpo comercial, e que permitirá estudar sua expressão durante o ciclo celular e em diferentes condições ambientais. Também sua interação com RNAs específicos será investigada através de co-imunoprecipitação e identificação dos RNAs por sequenciamento em larga escala (High-Throughput Sequencing of RNA isolated by Cross-Linking Immunoprecipitation (HITS-CLIP). Assim, a compreensão dos sinais regulatórios de sua expressão e de sua interação com RNAs permitirá a elucidação de seu papel celular. (AU)