Estudo do papel da RNA helicase RhlB da família DEAD-box na estabilidade dos RNAs e na expressão gênica em Caulobacter crescentus

Resumo

Caulobacter crescentus é uma ±-proteobactéria que passa por transições morfológicas distintas durante seu ciclo celular, o que a torna um excelente modelo para o estudo de morfologia e regulação gênica. Em situações de estresse, como choque-frio, C. crescentus passa por adaptações no seu metabolismo para manter sua viabilidade, que envolvem alterações na expressão gênica. Nestas condições, as moléculas de RNA tendem a formar estruturas secundárias estáveis, dificultando sua tradução e degradação. As RNA helicases são proteínas que têm a capacidade de remodelar estruturas de RNA e complexos de RNA-proteína, participando, em teoria, de processos associados com a expressão gênica. A família DEAD-box de RNA helicases é a maior e mais estudada em bactérias. Alguns membros desta família geralmente se encontram associados a um complexo multienzimático denominado degradossomo de RNA e participam em diversos processos celulares como degradação de RNAs, biogênese ribossomal e resposta a estresses. Estudos têm demonstrado a importância de uma dessas helicases (RhlB) para o fitness celular e adaptação das células em baixas temperaturas. O objetivo deste projeto é definir a participação da RNA helicase da família DEAD-box RhlB no processamento dos RNAs celulares e na biogênese do ribossomo em Caulobacter. Para isso, serão identificados os RNAs expressos na linhagem mutante rhlB sob diferentes condições de crescimento para avaliar o papel dessa helicase na expressão gênica global em resposta a estresse. Uma linhagem FLAG-RhlB será construída para verificar as interações físicas dessa helicase com os RNAs, particularmente sRNAs e mRNAs, e o mapeamento dos sítios de interação específicos dessa helicase com o degradossomo será feito por mutação sítio-dirigida. Serão realizados ensaios para verificar a associação de RhlB ao ribossomo, bem como avaliar sua participação na maturação do rRNA 5S.