Perfil de transcrição gênica de células t foliculares auxiliares (Tfh) e mudança isotípica de células b induzida por adjuvantes do tipo 1 ou tipo 2

Resumo

As células T foliculares (Tfh) representam uma população de linfócitos T CD4+ caracterizadas pela expressão do fator de transcrição Bcl6 e que apresentam capacidade singular de interagir com linfócitos B e promover os centros germinativos (CG). A interação destas Tfh com linfócitos B nos folículos de tecidos linfoides secundários leva à troca de isotipo de imunoglobulinas, maturação por afinidade e geração de linfócitos B de memória. Portanto, ao lado da influencia de células Th1, Th2 (e Th17) que guiam a seleção de isotipos, é crítico entender como as células Tfh participam neste processo. A participação de células Tfh em reações alérgicas ainda não está esclarecida. Sabe-se que Bcl6 reprime a expressão de GATA3, um fator de transcrição mestre da células Th2, porém células GC Tfh produzem IL-4 (mas não IL-13) de forma GATA-3 independente. Células Tfh produzem IL-21, citocina que é importante para sua diferenciação e manutenção. Porém, IL-21 reduz a troca de isotipo de IgE e animais deficientes em receptor de IL-21 produzem altos níveis de IgE e administração de IL-21 reduz a produção de IgE anti-OVA. Ainda mais, a geração de IgE pode ocorrer dentro e fora do GC. Em humanos a origem folicular vs extrafolicular da IgE não foi criticamente estudada, embora a produção local de IgE nas mucosas, usualmente associada com GC tem sido documentada. Nossa proposta é determinar o perfil de transcrição de células Tfh induzidas em condições Th2 ou Th1. Nos vamos avaliar duas hipóteses diferentes: Uma que avalia se o auxílio (help) dado pela Tfh em condições Th2 é de responsabilidade de uma célula Tfh não especializada, genérica. Neste caso, a troca isotípica seria influenciada pelo contato com esta célula Tfh genérica e as citocinas produzidas na vizinhança por células Th2 extrafoliculares. O modelo alternativo, postula a existência de subpopulações de células Tfh especializadas em auxilio do tipo Th2 (Tfh2) ou Th1 (Tfh1). Nossa estratégia envolve o uso de transferência adotiva de células CD4+ transgênicas com marcador congênico e imunização com adjuvantes que induzem imunidade do tipo 2 (alum) ou tipo1 (agonistas de TLRs). Isto possibilitará recuperar células T-específicas geradas em condições tipo 1 ou tipo 2 e uma análise subsequente por RNA-Seq permitira identificar assinaturas de genes associado com as células Tfh obtidas nestas condições. Ou seja, nos iremos utilizar células transgênicas, adjuvante tipo 1 e 2, e métodos bioinfomáticos de análise do perfil de transcrição de células Tfh, para poder definir a sua característica em diferentes estados imunológicos. Além de usar o modelo de OVA com imunização em condições tipo 2 ou tipo 1, também utilizaremos animais Bcl6-Cre que não possuem GC para excluir genes das células Tfh. (AU)