Papel dos AGCCs e seu receptor GPR43 na morte de neutrófilos induzida por bactérias anaeróbias

Resumo

A bactéria Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa) está envolvida no desenvolvimento de condições infecciosas como periodontites, abcessos e endocardite. A destruição desta bactéria depende da ativação, migração e ação efetora de células da imunidade inata e adaptativa, particularmente, de neutrófilos. Essas células atuam por diferentes mecanismos como a produção de espécies reativas de oxigênio e nitrogênio, liberação de proteases e enzimas quelantes, fagocitose e recrutamento de outros leucócitos na eliminação dos micro-organismos e restabelecimento da homeostase. Por outro lado, bactérias Aa apresentam mecanismos que dificultam sua eliminação pelo sistema imune incluindo a liberação de leucotoxina, proteína que induz apoptose de leucócitos. Nesse contexto, temos como objetivo investigar se produtos do metabolismo de bactérias, inclusive de Aa, os AGCCs (acetato, propionato e butirato), que, sabidamente, modulam funções importantes das células do sistema imune inclusive a migração, ativação e função efetora de neutrófilos, têm alguma participação na indução de morte de neutrófilos por Aa. Para tanto, realizaremos experimentos com neutrófilos isolados de camundongos e incubados com Aa e AGCCs. Parâmetros associados a morte celular como externalização de fosfatidilserina, integridade de membrana, atividade de lactato desidrogenase no meio e atividade de caspases (1, 3 e 11) serão mensurados. Citocinas inflamatórias (TNF-± e IL-1²) também serão quantificadas no sobrenadante das culturas. Com o intuito de investigar possíveis mecanismos, utilizaremos inibidores seletivos de caspases e animais nocautes para caspase-1 e receptor de AGCCs, GPR43. Faremos ainda o co-cultivo de neutrófilos (pré-incubados com bactérias e AGCCs) com macrófagos e analisaremos tanto a fagocitose de neutrófilos quanto a produção de citocinas pelos macrófagos. In vivo, investigaremos no modelo de câmara subcutânea a indução de morte de neutrófilos após inoculação de Aa acrescida ou não dos AGCCs. Nossa hipótese é que esses ácidos graxos produzidos no contexto da infecção por Aa modificam a sobrevivência de neutrófilos e com isso o resultado final do processo infeccioso e o grau de dano tecidual associado ao mesmo. (AU)