Caracterização imunogênica e funcional de duas lipoproteínas preditas de Leptospira interrogans expressas em Escherichia coli

Resumo

A leptospirose é uma zoonose de importância global recentemente incluída na lista das Doenças Tropicais Negligenciadas. Em áreas urbanas, os roedores desempenham o papel de principais reservatórios da doença por permitirem a colonização das leptospiras nos túbulos renais proximais e as excretarem vivas na urina. Não há vacina eficaz até o momento. A identificação de proteínas da membrana externa conservadas entre cepas patogênicas são os principais alvos de pesquisa para elucidar os mecanismos de patogenicidade. São estas proteínas que, provavelmente, estão envolvidas na interação das leptospiras com o ambiente externo, podendo também servir de alvo para o sistema imune do hospedeiro. Dentre estas proteínas, a classe das lipoproteínas é uma das mais importantes, sendo de grande interesse para o desenvolvimento de novas vacinas e diagnóstico. Neste sentido, o projeto propõe a clonagem e expressão de duas preditas lipoproteínas, identificadas por bioinformática no genoma de Leptospira interrogans. Os genes que codificam estas proteínas, LIC13059 e LIC10879 serão amplificados a partir do DNA genômico e oligonucleotídeos complementares. O inserto será clonado em vetor de expressão de E. coli. As proteínas recombinantes serão expressas sem o peptide sinal e em fusão com uma seqüência de seis resíduos de histidina (6XHis) na região N-terminal que permitirá a purificação dos recombinantes por cromatografia de afinidade a metal. As proteínas recombinantes serão avaliadas quanto: a atividade de imunogenicidade em modelo animal; a reatividade frente a soros hamsters infectados experimentalmente com leptospiras virulentas; a interação com macromoléculas do hospedeiro; a conservação nos diferentes sorovares patogênicos de L. interrogans; a caracterização da interação com componentes do tecido e plasma do hospedeiro. (AU)