Estudo da clivagem da laminina em tumores de mama, gerando potenciais peptídeos bioativos

Resumo

O câncer de mama representa importante problema de saúde pública com evidente morbidade e mortalidade. O microambiente onde as células neoplásicas se encontram desempenha importante papel na tumorigênese e progressão tumoral. Entre os componentes do microambiente tumoral destaca-se a matriz extracelular (MEC), formada por colágenos, proteoglicanos e glicoproteínas. Nosso Laboratório estuda o efeito da laminina, importante glicoproteína da MEC, em biologia tumoral. Investigamos sistematicamente o efeito in vitro de peptídeos da laminina no câncer. Sabemos que os mesmos são responsáveis por importante etapas da biologia tumoral, como migração, invasão, formação de invadopódios e secreção de proteases. Elucidamos também receptores e vias de sinalização por onde esses peptídeos atuariam. No entanto, um ponto a ser esclarecido e que representa contribuição fundamental nessa área é a determinação de quais peptídeos da laminina estariam presentes nos sítios tumorais in vivo. Esse aspecto até o momento permanece especulativo. Esse projeto possui como objetivo detectar in vivo peptídeos derivados da clivagem proteolítica da laminina. Iniciaremos estudando por imuno histoquímica a distribuição das cadeias alfa, beta e gama da laminina em tumores de humanos. Em paralelo analisaremos o perfil bioquímico da laminina em amostras tumorais in vivo, comparadas com tecidos normais. Esse perfil poderá evidenciar bandas de clivagem da laminina, expondo fragmentos contendo peptídeos bioativos. Entre esses peptídeos poderiam estar as sequências que estudamos anteriormente (Freitas & Jaeger 2002; Capuano & Jaeger 2004; Freitas et al. 2004a; Freitas et al. 2007; Morais Freitas et al. 2007; Gama-de-Souza et al. 2008; Nascimento et al. 2010; Siqueira et al. 2010; Nascimento et al. 2011; Caires dos Santos 2014; De Siqueira 2014). Essas bandas decorrentes de clivagem proteolítica serão submetidas a sequenciamento por métodos proteômicos, visando definir se nessas bandas estariam os peptídeos de interesse. Adicionalmente, essa abordagem poderá permitir a descoberta de novas sequências, cujo potencial bioativo poderá ser posteriormente investigado. Além de estabelecer o perfil de clivagem da laminina em tumores in vivo, realizaremos ensaios in vitro endereçando esse mesmo ponto. Células normais e tumorais em cultivo serão crescidas sobre laminina. Eletroforese e proteômica será posteriormente realizada, visando identificar peptídeos bioativos provenientes de clivagem da laminina. Finalmente, células tumorais serão tratadas pelos peptídeos eventualmente identificados, endereçando o papel dos mesmos em adesão, invasão, formação de invadopódios e tumorigênese. (AU)