Desenvolvimento de processo de fermentação em biorreator para produção de interferon ±-2a secretado no espaço periplásmico de Escherichia coli

Resumo

O Interferon foi o primeiro medicamento a demonstrar efeitos benéficos em pacientes com hepatite C, em 1986. Atualmente, todos os tratamentos da hepatite C são baseados no uso de preparações de IFN-± combinadas ou não com a ribavirina. A terapia resulta em rápido declínio dos níveis do vírus da hepatite C no soro e, a longo prazo, ocorre sua extinção no soro e fígado, ocorrendo a cura da infecção crônica. Os interferons alfa-2 (IFN-±2) são parte de um grupo heterólogo de proteínas com atividades biológicas semelhantes. Os três principais subtipos de IFN-±2 são designados ±-2a, ±-2b e ±-2c. O objetivo fundamental desse projeto é a produção de IFN±-2a em escala laboratorial a partir de bactérias E. coli modificadas geneticamente, para isso algumas metas intermediárias necessitam ser atingidas. A primeira dessas metas é validar um método de análise qualitativa e quantitativa por HPLC de fase reversa que permita avaliar o IFN ±-2a presente no extrato bruto bacteriano obtido a partir de choque osmótico. Essa técnica será extremamente útil nas próximas etapas, como na otimização de um processo rápido e eficiente de fermentação em biorreator para produção de IFN ±-2a utilizando a cepa W3110 transformada com o vetor LambdaPL-DsbA-IFN±-2a. Essa cepa, desenvolvida em nosso laboratório, é capaz de secretar interferon no espaço periplásmico bacteriano, portanto na sua forma autêntica. Outra meta desse projeto é realizar a purificação do IFN±-2a em escala laboratorial. O produto final, após caracterização físico-química e biológica poderá ser utilizado como padrão de referência em estudos futuros, incluindo possíveis aplicações terapêuticas. (AU)