Papel do microRNA-205 no déficit angiogênico mediado pela sinalização de FAK na hipertensão arterial: efeito do treinamento físico e perspectiva do potencial terapêutico

Resumo

A hipertensão arterial (HA) é uma síndrome multifatorial caracterizada por níveis elevados e sustentados de pressão arterial (PA). O treinamento físico (TF) aeróbio tem sido utilizado como um importante tratamento não farmacológico da HA, uma vez que ele corrige a rarefação microvascular e reduz a PA; entretanto, os mecanismos envolvidos são pouco conhecidos. Uma nova classe de pequenos RNAs, denominados de microRNAs (miRNAs), vem sendo muito estudados por regularem pós-transcricionalmente a expressão de seus genes alvo. Estudos avaliando o papel dos miRNAs na regulação do processo angiogênico tanto na HA quanto induzidos pelo TF são desconhecidos. Com base na análise do perfil de expressão de miRNAs pelo microarray, selecionamos o miRNA-205 para o presente estudo por ser um dos miRNAs mais diferencialmente expressos na HA e por alvejar um amplo número de genes envolvidos com o processo angiogênico; o que o tornaria um potencial alvo terapêutico perante as alterações vasculares na HA. Portanto, nosso objetivo é investigar o papel do miRNA-205 na reduzida capacidade angiogênica mediada pela sinalização de FAK/ integrina de ratos espontaneamente hipertensos (SHR) e verificar o papel terapêutico do TF na correção desses parâmetros. Na primeira etapa do projeto, SHR com 6 meses de idade no início do protocolo e seus respectivos controles Wistar Kyoto (WKY) serão divididos em 4 grupos experimentais (n=7/grupo): SHR, SHR treinado (SHR-T), WKY e WKY treinado (WKY-T). O TF de natação consistirá de 10 semanas de duração, 1x dia/ 5x na semana/ 10 semanas. Serão analisados a PA e a freqüência cardíaca no repouso por plestimografia de cauda, a capacidade de tolerância ao esforço e o VO2 pico pós TF. Após sacrifício, serão feitas análises morfológicas do músculo sóleo como a área de secção transversa, razão capilar por fibra e perfil de tipos de fibra pelo método de histoquímica. Serão realizadas análises da expressão do miRNA-205 e respectivos alvos relacionados com o controle do processo angiogênico e integridade vascular. Na segunda etapa do projeto, será realizada a validação do gene alvo Itga5 para o miRNA-205 por meio do ensaio de luciferase e a análise da expressão protéica de FAK mediada pela sinalização de integrina. Avaliaremos o ganho e a perda de função da célula endotelial (HUVEC) in vitro por meio da transfecção de antagomiR/ miRmimic-205 ou um oligonucleotídeo incompatível com o miRNA estudado como controle (scramble) sobre a proliferação, migração e a formação de tubos como capilar sobre matrigel; e a expressão do miRNA-205 e dos seus genes alvo validados e preditos. Na terceira etapa, avaliaremos a resposta angiogênica em anéis de aorta de WKY e SHR ex vivo por meio da transfecção de antagomiR/ miRmimic-205 e do inibidor de FAK. Assim, testaremos a hipótese da participação do miRNA-205 na regulação do processo angiogênico, o qual poderia ser futuramente utilizado como fonte terapêutica para a HA.