Diagnóstico genético molecular em pacientes com distúrbios do desenvolvimento hipofisário e gonadal e a utilização de modelos in vitro e in vivo para avaliar o efeito funcional das variantes alélicas identificadas por sequenciamento de larga escala

Resumo

O desenvolvimento das técnicas de biologia molecular para avaliar inicialmente genes candidatos pelo sequenciamento de Sanger e posteriormente pela análise da região traduzida de todos os exons do genoma humano (exoma) pelo sequenciamento em larga escala (SELE) levou ao diagnóstico molecular crescente na pesquisa de doenças genéticas. O sequenciamento de Sanger permitiu determinar em nossa casuística o diagnóstico molecular em cerca de 10% dos pacientes portadores de distúrbios do desenvolvimento hipofisário e de 20% dos portadores de distúrbios do desenvolvimento sexual (DDS) acompanhados no ambulatório de Endocrinologia do Desenvolvimento. A utilização do SELE permitiu identificar 2 novos genes potencialmente envolvidos nos distúrbios do desenvolvimento hipofisário (CDH2) e gonadal (DHX37). De acordo com as diretrizes para investigar a causalidade de variantes na sequência genômica e a sua associação com a doença humana, publicado pelo Instituto Nacional Americano de Investigação do Genoma Humano, a força da correlação entre o achado de uma variante alélica e o fenótipo do paciente se faz com evidencias a nível genético e experimental. No primeiro, considera-se fundamental a presença de variantes em um mesmo gene em pacientes não relacionados e no segundo, a associação causal dessa variante no contexto funcional. Diante disso, o presente projeto tem o objetivo de analisar, via sequenciamento de Sanger, pacientes com hipopituitarismo na busca de variantes no gene CDH2, validar o comprometimento funcional das variantes encontradas por modelos in vivo e in vitro, assim como as variantes encontradas no gene DHX37. Pretendemos ainda submeter ao exoma aqueles paciente que não tiverem alterações no gene CDH2 no intuito de identificar novos genes associados ao hipopituitarismo. (AU)