Desenvolvimento de queratinócitos da linhagem HaCaT nocautes para a enzima PKM2

Resumo

Os queratinócitos são as células presentes na epiderme que exercem um papel central em respostas inflamatórias na pele, participando ativamente do desenvolvimento e manutenção de certas patologias, como a psoríase. Nos últimos anos, têm sido demostrado que células ativadas com estímulos inflamatórios sofrem uma reprogramação metabólica que culmina no aumento da expressão de genes envolvidos com a via glicolítica, um fenômeno conhecido como glicólise aeróbica ou efeito de Warburg. O fator de transcrição HIF-1± é essencial para o desenvolvimento do efeito Warburg, pois promove a transcrição de diversas enzimas da glicólise aeróbica, dentre elas a enzima Piruvato Kinase M2 (PKM2). A PKM2 apresenta duas conformações estruturais, tetramétrica ou dimérica, apresentando função de piruvato quinase e de co-fator transcricional de HIF-1±, respectivamente. Estudos recentes tem demonstrado que a PKM2 pode ser ativada por estímulos inflamatórios, sendo importante para a secreção de citocinas e proliferação celular. Neste sentido, resultados um projeto de doutorado em andamento em nosso laboratório demonstram que a PKM2 está altamente expressa na pele de pacientes e de animais com psoríase. No entanto, não há estudos na literatura sobre a participação da PKM2 na ativação de queratinócitos. Assim, o objetivo deste presente projeto de iniciação científica (IC) é gerar uma linhagem celular de queratinocitos (HaCat) nocaute para a enzima PKM2, a qual será posteriormente utilizada como ferramenta para investigações detalhadas da participação dessa enzima em ativação de queratinócitos e desenvolvimento e manutenção da psoríase.