Estudo do papel de componentes do sistema renina-angiotensina na imunomodulação de fibroblastos de polpa dental de dentes decíduos.

Resumo

A polpa dental de dentes decíduos é um tecido que passa por alterações celulares e moleculares importantes como resultado da cárie dentária. Conhecido como um tecido distinto daquele oriundo de dentes permanentes, merecem atenção estudos que elucidem mecanismos moleculares envolvidos com estas alterações. O objetivo deste estudo é investigar componentes do Sistema Renina Angiotensina em mecanismos moleculares envolvidos com a modulação do processo inflamatório em células pulpares de dentes decíduos. Culturas de fibroblastos serão estabelecidas por meio de uma técnica de explant a partir de polpa dental de dentes decíduos. As células serão estimuladas com concentrações crescentes de ácido lipoteicóico (LTA), lipopolissacarídeo (LPS) e Interleucina(IL)-1² para detecção de expressão gênica de receptor de Angiotensina (AT1), receptor Mas, Enzima Conversora de Angiotensina (ECA) e ECA2 além de Fator de Necrose Tumoral(TNF)-± e Receptor Ativador de NF-ºB (RANKL). Os níveis protéicos de AT1, Mas, ECA e ECA2 serão investigados por citometria de fluxo e de RANKL e TNF-± por ensaio imunoenzimático (ELISA). O papel de AT1, Mas, ECA e ECA2 na produção de mediadores pró- e anti-inflamatórios além de colágeno I e ±-Actina de Músculo Liso (±-SMA) será investigado por meio de bloqueio farmacológico e silenciamento gênico. Posteriormente, as células serão estimluladas com Angiotensina II (AngII) e Ang(1-7) para avaliação dos mesmos parâmetros. O papel da ativação do Fator Nuclear-ºB (NF-ºB) e do receptor de Fator de Crescimento Transformador (TGF)-²1 nos efeitos de AngII e Ang(1-7) será investigado por meio de bloqueio farmacológico. Por fim, a modulação dos eventos observados por microRNAs será investigado por meio da detecção destas moléculas por Transcrição Reversa (RT) seguida de Reação em Cadeia da Polimerase quantitativa (qPCR) seguida do silenciamento gênico. Para análise estatística, os dados serão submetidos à Análise de Variância (ANOVA) seguida do teste de correção de Bonferroni sendo considerados significativos valores de p<0,05.