Efeito da atividade simbiótica sob a integridade do epitélio intestinal em microbiota obesa e eutrófica

Resumo

O epitélio intestinal humano é uma barreira que separa o conteúdo celular interno do externo, prevenindo a entrada de substâncias prejudiciais. Estudos têm demonstrado que o aumento da permeabilidade intestinal está associada à várias doenças, tais como a obesidade. A microbiota intestinal é alvo de várias vias de sinalização intracelular e pode regular a função da barreira intestinal da mesma forma como algumas fibras prebióticos e cepas probióticas, as quais têm a capacidade melhorar a função da barreira intestinal e, em alguns casos, prevenir ou inverter os efeitos adversos de agentes patógenos. O objetivo deste trabalho será avaliar o efeito da combinação entre uma cepa probiótica e um subproduto de fruta tropical na integridade da barreira intestinal por meio de resistência elétrica transepitelial, expressão das proteínas da "tight junction" e analisar a citotoxicidade das células Caco- 2 durante tratamento em um Simulador do Ecossistema Microbiano Humano (SEMH®) utilizando fezes de voluntários obesos e eutróficos. Serão coletadas amostras de cada região que simula o cólon (cólon ascendente, transverso e descendente) do SEMH ®, durante os períodos de controle, de tratamento com a combinação e de pós-tratamento utilizando microbiota obesa e eutrófica. Será determinada a resistência elétrica transepitelial, por meio de monocamadas polarizadas de células epiteliais do intestino humano (Caco-2), durante todos os períodos de experimentos no SEMH® (controle, tratamento e pós-tratamento) utilizando as duas microbiotas. Será realizada a expressão de RNAm das "tigh junction" por qPCR (Fluidigm sistema qPCR) das amostras das regiões do cólon que apresentarem mudanças na TEER. A citotoxicidade das células Caco-2 será realizada por MTT (brometo de 3- [4,5-dimetiltiazol-2-il] -2,5-difeniltetrazólio) utilizando amostras do SEMH ®. O sequenciamento do gene rRNA 16S das amostras do SEMH® será realizado utilizando a plataforma Illumina MiSeq®. Será utilizado o programa SPSS para a análise estatística dos resultados do ensaio de MTT, das medições TEER e da expressão do mRNA. Os dados serão avaliados por meio de análise de variância seguida pelo teste de Tukey caso os dados apresentarem distribuição normal e, teste não paramétrico Kruskal-Walls com correções de Bonferroni se os dados não apresentarem distribuição normal. (AU)