Análise funcional da histona H2B variante de Trypanosoma cruzi

Resumo

O Trypanosoma cruzi é um eucarioto unicelular, agente causador da Doença de Chagas que alterna entre formas replicativas e não infectivas (epimastigotas e amastigotas) e formas não-replicativas e infectivas (tripomastigotas celulares e sanguíneas). A diferenciação entre estas formas é acompanhada tanto por diferenças dos níveis globais de transcrição quanto por alterações estruturais na cromatina. Diversos estudos apontam que a cromatina dos tripanossomas contem diversas alterações epigenéticas, incluindo deposição de variantes de histonas, enriquecidas em sítios putativos de início de transcrição. Recentemente verificamos que a histona H2Bv de T. cruzi está presente em maior quantidade na cromatina das formas não replicativas, sugerindo que a mesma possa desempenhar algum papel importante frente às diferenças fenotípicas (de expressão gênica e estrutura da cromatina) observadas entre as formas de vida de T. cruzi. Assim, neste trabalho, pretendemos estudar o papel da histona H2Bv neste parasita. Para tal, iremos: I. Identificar os parceiros de interação desta histona variante através de ensaios de co-imunoprecipitação e pulldown; II. Identificar as regiões genômicas em que esta proteína se associa, através de ensaios de imunoprecipitação da cromatina (ChIP); III. Analisar se H2Bv está preferencialmente presente em eucromatina e heterocromatina, através de ensaios de microscopia eletrônica e digestão parcial com MNase; IV. Gerar parasitas nocautes para H2Bv e avaliar o fenótipo nas diferentes formas durante o ciclo de vida; V. Avaliar o fenótipo das formas epimastigotas e células de mamíferos que superexpressam H2Bv. (AU)