ATP sulfurilase: sua relação com o fator de transcrição Cys3 e a regulação da biossíntese dos aminoácidos sulfurosos em Cryptococcus neoformans

Resumo

C. neoformans é um fungo oportunista que acomete pacientes imunocomprometidoscausando infecções letais como a meningite criptocócica. Em decorrência da resistênciadeste patógeno aos medicamentos atuais, da escassez de antifúngicos e de tratamentosineficazes, o estudo sobre os mecanismos de virulência de C. neoformans é de grandeimportância médica. Os fungos são eucariotos, assim como os seus hospedeiros,tornando muito difícil a identificação de novos alvos farmacológicos que tenham altatoxidade seletiva. A via de síntese de aminoácidos sulfurosos é exclusiva das bactérias,plantas, parasitas e dos fungos, é de extrema importância para a sobrevivência de C.neoformans in vitro e in vivo e representa um potencial alvo de inibidores com altatoxicidade seletiva. Os mecanismos de regulação desta rota de biossíntese têm sidomuito estudados, sendo que o fator de transcrição central, Cys3, controla a ativação devários genes desta via biossintética. Nossos estudos anteriores de imunoprecipitação eespectrometria de massas apontaram que Cys3 faz parte de um complexo contendovárias proteínas. Dentre estas, duas fosfatases (calcineurina e a fosfatase Gpp2), foramconfirmadas como sendo parte deste complexo regulatório. Uma quarta proteína, a ATPsulfurilase, foi identificada, mas ainda não foi confirmada como participante destecomplexo de proteínas. Este projeto parte da hipótese de que a ATP sulfurilasecodificada pelo gene MET3 interage fisicamente com a proteína Cys3 modulando aativação da via de captação de enxofre e biossíntese dos aminoácidos sulfurosos. Estahipótese será testada por técnica de deleção gênica, western blot, microscopia defluorescência e interação por duplo híbrido em leveduras. Todas estas técnicas são dedomínio do Laboratório de Interações Microbianas da UNIFESP. Espera-se que comeste trabalho seja possível conhecer melhor os mecanismos regulatórios desta via que étão importante para a virulência.