Mecanismos envolvidos na progressão de doenças renais em modelos experimentais de nefrotoxicidade induzida por adriamicina ou de isquemia/reperfusão e Diabetes

Resumo

A Lesão Renal Aguda (LRA) é uma das causas mais comuns para a progressão da Doença Renal Crônica (DRC) e consequente perda da função renal. Contudo, os mecanismos fisiopatológicos associados à transição da LRA para DRC em condições de nefrotoxicidade medicamentosa, Diabetes Mellitus ou isquemia/reperfusão renal são pouco conhecidos. Dessa forma, a atual proposta é composta por dois subprojetos cujo objetivo geral é apontar os principais mecanismos envolvidos na progressão de doenças renais, ressaltando a lesão de podócitos no modelo de Glomeruloesclerose Segmentar Focal (GESF) induzida por adriamicina, bem como as lesões glomerulares, intersticiais e tubulares em modelo de isquemia/reperfusão renal associada ou não ao Diabetes. A nossa hipótese é que no modelo de GESF induzida por adriamicina, a injúria de podócitos associada à proteinúria tenha relação com o estresse de retículo endoplasmático sustentado, redução da expressão de sirtuína-1 e aumento da expressão da claudina-1, bem como o aumento da resposta apoptótica. No modelo de isquemia/reperfusão renal, a pré-existência de Diabetes associada aos processos inflamatórios e fibróticos deverão potencializar a lesão renal aguda antecipando a progressão da doença renal crônica. Modelos experimentais: Camundongos da linhagem BALBc com 5 semanas de idade serão utilizados para a indução de GESF por adriamicina ou tratamento com SRT1720-agonista da sirtuína-1 (CEUA-ICB/USP nº 3425170518). Camundongos da linhagem C57BL/J com 8 semanas de idade serão utilizados para a indução de Diabetes por streptozotocina e isquemia/reperfusão renal (CEUA-ICB/USP nº 12/2017). Os estudos in vitro serão realizados em cultura primária de podócitos de camundongos BALBc e linhagem celular. Nesse estudo também será avaliada a expressão de sirtuina-1 e claudina-1 em biopsias de rins humanos com GESF. As metodologias previstas incluem análise de parâmetros metabólicos no plasma e urina, PCR quantitativo (qPCR) para avaliar a expressão de RNAm no tecido renal, western blotting, imunofluorescência e imunohistoquímica para avaliar a expressão de proteínas, de fatores inflamatórios e fibróticos, bem como análises morfológicas do tecido renal. A análise estatística dos resultados será realizada pelos métodos one-way ou two -way ANOVA e o pós-teste de Bonferroni; p<0,05 será considerado significativo em comparação aos respectivos grupos controle. Os resultados serão apresentados como valor médio ± erro padrão. (AU)