Fatores envolvidos na progressão da lesão renal induzida por nefropatia cristalina ou isquemia/reperfusão: estudos in vivo e in vitro

Resumo

A nefropatia cristalina (NC) e a isquemia renal seguida de reperfusão (IR) induzem lesão renal aguda (LRA), mas não há dados concretos relativos ao tratamento, moléculas de reparo tecidual ou a progressão da LRA para a fase crônica em ambas as patologias, ou recidiva no caso da NC. Estudos recentes de nosso grupo evidenciaram um aumento nos perfis inflamatório e fibrótico do tecido renal, bem como uma queda significativa na expressão das proteínas megalina e Tamm Horsfall (THP), durante a fase aguda da NC e da IR em modelos experimentais. A nossa hipótese é que apesar da capacidade de reparo do tecido renal após um insulto, os fatores inflamatórios e fibróticos presentes na fase aguda, podem se tornar moléculas relevantes na progressão da lesão renal para a fase crônica, ou recidiva no caso da NC, interferindo na função renal. O objetivo do presente estudo é identificar os fatores envolvidos com a LRA, no reparo do tecido renal após o insulto ou na progressão da fase aguda para crônica em modelos experimentais in vivo (nefropatia cristalina, isquemia/reperfusão) e in vitro (culturas celulares de componentes do néfron e do sistema imune). Para tal, são apresentados dois subprojetos. No subprojeto 1 - nefropatia cristalina: serão investigados os fatores envolvidos na injúria e reparo tecidual nas fases aguda, progressiva e após a recidiva, com foco nos fatores inflamatórios, fibróticos e no possível papel renoprotetor da THP. No subprojeto 2 - isquemia/reperfusão: serão investigados os fatores de injúria tubular (inflamação, apoptose e fibrose) e o processo de autofagia (reparo celular) no tecido renal dos grupos agudo e crônico. Para responder os objetivos serão utilizados camundongos machos da linhagem C57BL/6J com idade de 08 semanas. No subprojeto 1 os animais serão organizados em grupos controle, tratados com oxalato de sódio (NaOx, 90 mg/kg de peso corporal, única injeção i.p. para induzir a NC) ou co-tratados com NaOx + THP sintética (170 µg/kg de peso corporal, única injeção i.p.) e acompanhados por 24 h ou 30 dias, sendo este último grupo subdividido em crônico e crônico + recidiva com NaOx (90 mg/kg de peso corporal) e acompanhado por 24 hs. No subprojeto 2 os animais serão organizados em grupos controle (Sham) e submetidos a isquemia renal (30 min) seguida de reperfusão por 48 h ou 28 dias. Os estudos in vitro do subprojeto 1 serão realizados em co-culturas celulares do segmento espesso ascendente da alça de Henle, células dendríticas, macrófagos, células do túbulo proximal e do glomérulo, as quais serão tratadas com suspensão de oxalato de cálcio (200µg/mL) e/ou THP (10 µM) ou leupeptina (10 µM, inibidor da hepsina - enzima que catalisa a clivagem de THP) por 48 h. Para a isquemia/reperfusão em culturas celulares de túbulo proximal e alça espessa ascendente de Henle, as monocamandas serão tratadas com antimicina A por 3 h e reperfundidas com meio de cultura regular por 1, 3, 6, 12 e 24 h. As técnicas utilizadas incluem: clearance e função renal, cultura celular, western blotting, PCR quantitativo e análise morfológica por microscopia. (AU)