Síntese de gonadotrofina coriônica humana recombinante em células CHO e HEK-293, purificação e caracterização físico-química

Resumo

A gonadotrofina coriônica humana (hCG) é um hormônio glicoproteico produzido por células do tecido sinciciotrofoblasto do córion, uma porção da placenta, durante a gestação. A massa molecular média do hCG é 37,18 kDa, e corresponde a duas subunidades, ± e ², de 92 e 145 resíduos de aminoácidos, respectivamente, acrescidas de glicanos covalentemente ligados. A subunidade ± (comum para o hTSH, hFSH e hLH) possui dois sítios de N-glicosilação, enquanto a ² dois sítios com N-glicosilação e quatro com O-glicosilação. O hCG promove a fixação do embrião no endométrio e a produção de progesterona pelo corpo lúteo. É uma proteína terapêutica utilizada em tratamentos de criptorquidia, hipergonadismo masculino e principalmente em fertilização assistida. As preparações terapêuticas disponíveis no mercado provêm de hCG purificado a partir de urina de mulheres grávidas ou na forma recombinante (rhCG), obtido em cultivo de células CHO (células de ovário de hamster chinês). Este trabalho propõe realizar a síntese do hCG por expressão transiente em células CHO e HEK-293, purificar e caracterizar o hormônio obtido por métodos físico-químicos e biológicos. Serão avaliadas três linhagens: uma cepa CHO e outra HEK-293, ambas comerciais; e uma cepa CHO desenvolvida em nosso laboratório. As estruturas dos glicanos serão estudadas e comparadas com as apresentadas por uma hCG referência ou obtida de produto comercial. Para isso está previsto a implantação de metodologias baseadas em análises cromatográficas e espectrometria de massas, em colaboração com outras instituições de São Paulo. (AU)