Manipulação genética de fatores de transcrição envolvidos na secreção de enzimas recombinantes em Aspergillus nidulans

Resumo

Os fungos filamentosos são capazes de secretar uma grande quantidade de proteínas e são utilizados como plataforma para a produção de enzimas industrialmente relevantes. No entanto, os níveis de produção de proteínas recombinantes ainda precisam ser melhorados. Neste sentido, muitas estratégias têm sido aplicadas para melhorar sua capacidade de produção, porém, como há um aumento na demanda do mercado e a produtividade ainda é relativamente baixa, identificar novos alvos genéticos para promover o aumento da secreção enzimática torna-se cada vez mais importante. Assim sendo, o objetivo central deste projeto é avaliar a produção/secreção de uma enzima recombinante em cepas de Aspergillus nidulans em que fatores de transcrição alvo foram manipulados (deletados e/ou super-expressos) geneticamente. Os fatores de transcrição a serem manipulados foram selecionados a partir de dados de RNA-seq de cepas de A. nidulans super-expressando três enzimas heterólogas. Estas análises de RNA-seq, somando-se a um ensaio de secreção de proteases, demostraram que estes fatores de transcrição estão possivelmente envolvidos em diferentes processos biológicos relacionados a via de secreção de proteínas. Sendo assim, este estudo pretende encontrar fatores de transcrição envolvidos na produção/secreção de proteínas recombinantes em A. nidulans, e gerar cepas mutantes superiores para produção de enzimas recombinantes de interesse biotecnológico. Além disto, pretendemos descrever os mecanismos envolvidos neste aumento de produção. Desta maneira, esses objetivos podem proporcionar recursos para propor melhores estratégias de engenharia racional de modo a melhorar o processo de secreção em fungos filamentosos. (AU)