Decifrando o efeito da deleção da via N-glicosilação na secreção de enzimas de Aspergillus nidulans

Resumo

O gênero Aspergillus inclui microrganismos que naturalmente degradam a biomassa lignocelulósica, secretando grandes quantidades de enzimas ativas em carboidratos (CAZymes), o que caracteriza seu estilo de vida saprófito. Entre outras CAZymes, as ²-xilosidases são glicosil hidrolases (GHs) que auxiliam na degradação da biomassa vegetal pela liberação de xilose de xiloligossacarídeos na completa degradação da hemicelulose. Além da capacidade de secretar grandes quantidades e uma variedade de enzimas, A. nidulans é um organismo modelo que possui um ciclo sexual bem caracterizado e um sistema genético manipulável, dando vantagens ao desenvolvimento e construção de linhagens mutantes. O Aspergillus é capaz de realizar modificações pós-traducionais (MPTs) tais como clivagem proteolítica, formação de ligação dissulfeto e glicosilação de proteínas, fornecendo uma vantagem adicional para o uso de tais organismos como um hospedeiro para produção de proteína em larga escala. A N-glicosilação ligada à asparagina é uma MPT prevalente em sistemas eucarióticos. A N-glicosilação de proteínas é essencial para uma gama de processos celulares tais como respostas imunes, comunicação celular, transporte intracelular, estabilidade, secreção, enovelamento e atividade proteica. Com base em dados preliminares, nossa hipótese é que a deleção de genes envolvidos na montagem de N-glicanas em A. nidulans pode modular a secreção de uma proteína alvo ou proteínas em geral. Inicialmente, uma cepa de A. nidulans superexpressando uma ²-xilosidase homóloga (AN8401) será a cepa modelo para a deleção de alguns genes associados à via de N-glicosilação. A influência da deleção dos genes será então avaliada em relação ao crescimento fúngico, secreção de ²-xilosidase e secreção proteica total. (AU)