Sequenciamento de nova geração e avaliação funcional de variantes genéticas em indivíduos com DDS 46,XX testicular/ ovotesticular SRY-negativo

Resumo

A determinação sexual em humanos é estabelecida a partir do balanço de vias de sinalização que atuam em paralelo e de modo antagônico. As vias pró-testiculares passam pela ativação do gene SRY, sendo este um fator-gatilho para formação do testículo. Evidências têm sugerido a existência de um módulo genético de determinação ovariana, o qual é provavelmente composto por mais de um fator que fazem às vezes do SRY na determinação gonadal da fêmea. No entanto, os fatores-gatilho para o desenvolvimento do ovário ainda não estão totalmente conhecidos. As variações do desenvolvimento gonadal estão dentro do espectro de Distúrbios/Diferenças/Diversidades do Desenvolvimento do Sexo (DDS). Entre as raras formas de DDS, a DDS 46,XX testicular/ovotesticular (DDST/OT) apresenta tecido testicular na gônada de indivíduos 46,XX. Parte da etiologia da DDST/OT é explicada pela translocação do gene SRY, porém a etiologia dos casos SRY-negativos não está totalmente compreendida. Nos últimos anos, variantes genéticas de NR2F2 (nuclear receptor subfamily 2 group F member 2), que codifica o fator de transcrição COUP-TF2 (Chicken Ovalbumin Upstream Promoter Transcription Factor 2), foram descritas em indivíduos com DDST/OT SRY-negativo. Recentemente, nosso grupo de pesquisa descreveu pela primeira vez uma deleção de novo de 3 Mb no lócus 15q26.2 em heterozigose, que contém o gene NR2F2, em um indivíduo com DDSOT SRY-negativo. Revendo outros casos com DDST/OT SRY-negativo com etiologia genética indeterminada, seguidos em nosso serviço, uma nova variante alélica de NR2F2 do tipo frameshift foi identificada. Em humanos, o NR2F2 expressa diferentes isoformas a partir de splicing e sítios de iniciação de transcrição alternativos (A, B e C), porém evidências clínicas relacionando esse gene a DDS estão restritas à isoforma canônica A. Ademais, apesar da conhecida expressão de COUP-TF2 em células da granulosa e Sertoli adultas, a rede de genes regulados por COUP-TF2 que orquestram a determinação sexual e a manutenção do fenótipo gonadal em humanos é pouco conhecida. Com base nesse racional, os objetivos deste projeto são de 1) rastrear variantes alélicas potencialmente patogênicas em indivíduos com DDST/OT SRY-negativo por Sequenciamento Exômico Completo e, numa abordagem inovadora, 2) identificar, as vias de sinalização reguladas por COUP-TF2 em linhagem humana de células da granulosa e Sertoli-like por Sequenciamento de RNA, e também 3) avaliar o efeito de novas variantes alélicas de NR2F2 sobre a atividade de transcrição de COUP-TF2 por um novo ensaio funcional isoforma-específica. Este projeto ambiciona expandir o conhecimento sobre a determinação sexual humana ao elucidar o diagnóstico molecular de casos de DDST/OT SRY-negativo e, com isso, avançar no entendimento da função do COUP-TF2 no desenvolvimento gonadal. (AU)