Avaliação do tratamento com inibidor de TNF-alfa (adalimumabe) sobre os efeitos deletérios promovidos pelo tabagismo nos tecidos cartilagino e ósseo: estudos in vitro e in vivo

Resumo

O tabagismo configura como um dos principais fatores de risco para desenvolvimento de doenças cardiovasculares, pulmonares e diferentes tipos de câncer. Além disto, também é um fator importante para a exacerbação de doenças que acometem o sistema musculo-esquelético, como a osteoartrite. Em estudos prévios desenvolvidos por nosso grupo, já demonstramos os efeitos deletérios da exposição à fumaça de cigarro sobre o tecido ósseo, com aumento da produção de citocinas que promovem aumento da osteoclastogênese e diminuição da atividade dos osteoblastos, acarretando alteração da composição do tecido, predispondo a uma maior fragilidade. Entre estas citocinas que apresentam aumento pela exposição à fumaça de cigarro, está o TNF-alfa. O aumento de TNF-alfa está associado ao aumento da produção de espécies reativas de oxigênio (ERO) e da morte celular (apoptose). Na osteoartrite, a diminuição da produção do colágeno do tipo II pelos condrócitos está descrito como um dos fatores principais envolvidos no desenvolvimento e progressão desta doença. Em estudo desenvolvido por nosso grupo, avaliamos amostras de cartilagem retiradas de indivíduos submetidos à artroplastia total de quadril tabagistas e não tabagistas. O estudo ainda está em andamento, mas já demonstramos um aumento da apopotose de condrócitos, bem como a diminuição da porcentagem de colágeno do tipo II e de quimiocinas como o TNF-alfa, nos pacientes tabagistas comparados aos não tabagistas, sugerindo o tabagismo como um fator de exacerbação das repostas. Desta forma, pretendemos desenvolver dois projetos, um " in vivo" e outro "in vitro", utilizando um inibidor de TNF alfa já utilizado comercialmente para avaliarmos os efeitos deste tratamento em parâmetros estruturais e sistêmicos, bem como celulares já estudados por nosso grupo em trabalhos anteriores. Projeto 1: avaliação do tratamento com inibidor de TNF-alfa (Adalimumabe) em camundongos expostos à fumaça de cigarro, seguindo protocolo de exposição já extensivamente utilizado por nosso grupo (exposições diárias, 2 X ao dia, 30 min em câmara de exposição de corpo inteiro). Adalimumabe será administrado por via intraperitoneal em dias específicos e 1 hora antes do início da exposição à fumaça de cigarro. Após o término do protocolo, os animais serão anestesiados e eutanasiados para retirada da articulações femurotibiais. Neste material serão feitas análises histomorfométricas e histológicas referentes ao tecido ósseo e cartilaginoso assim como de quimiocinas pró-inflamatórias envolvidas no metabolismo destes dois tecidos. Projeto 2: Será avaliado o tratamento com Adalimumabe em cultura de condrócitos cultivadas em meio de cultura com extrato de cigarro (concentração do extrato já padronizada para manutenção destas células vivas por 48 h). Avaliaremos parâmetros que descrevam viabilidade celular, assim como expressão de espécies reativas de oxigênio, marcadores celulares de apoptose, expressão de TNF-alfa e de colágeno tipo II em homgenato de cartilagem. Utilizaremos um inibidor de TNF-alfa utilizado comercialmente (ainda a padronizar concentração) para tratar estes meios expostos ao extrato de cigarro para verificar os efeitos deste tratamento nos parâmetros avaliados. (AU)