Avaliação do panorama de acilações pós-traducional de histonas causadas por ácidos graxos de cadeia curta no intestino

Resumo

Os ácidos graxos de cadeia curta (SCFA) produzidos pela microbiota atuam de várias maneiras nas células epiteliais do intestino para regular a expressão gênica e têm sido associados ao estado metabólico das células. As modificações pós-traducionais de histonas (hPTM) ganharam destaque com o desenvolvimento de tecnologias baseadas em espectrometria de massa (MS) e a descoberta de acilações não clássicas, como crotonilação, butirilação e propionilação. No entanto, falta uma determinação abrangente e detalhada de como essas hPTMs no intestino estão ligados aos SCFAs. Este projeto propõe o uso de cultura organoide do ceco e cólon usando marcação de isótopos estáveis por aminoácidos em cultura celular (SILAC) para identificação e quantificação de padrões complexos de acilações pós-traducionais de histonas em células epiteliais intestinais tratadas com crotonato e butirato usando MS. Além disso, para aumentar a precisão da identificação e quantificação in vivo de hPTMs pelo método super-SILAC, as células obtidas do cultivo de organoides serão utilizadas como um padrão interno spike-in para os tecidos de cólon e ceco, obtendo assim um background de acilação semelhante à linha de base encontrada nas células epiteliais intestinais de cada órgão como controle. Além disso, os animais serão tratados com antibióticos para depleção aguda da microbiota e o panorama de acilações in vivo será caracterizado. Com base nos dados do MS, espera-se que as modificações das histonas estejam associadas a funções específicas nas células epiteliais que podem ser validadas por imunoprecipitação da cromatina (ChIP). Finalmente, esses dados podem fornecer a base mecanística para o controle da expressão gênica pela microbiota via SCFA nas células epiteliais do intestino e seu papel na homeostase. (AU)