Investigação do papel da Argonauta na infecção por Leishmania braziliensis

Resumo

Leishmaniose se refere a um conjunto de doenças com alto grau de diversidade de manifestações, sendo a interação entre parasito e hospedeiro um fator determinante. Embora alguns dos mecanismos moleculares por trás dessa relação estejam bem descritos, há muito ainda a ser estudado, incluindo aspectos específicos de cada espécie e suas respectivas implicações na patologia. Leishmania braziliensis é o principal agente causador da leishmaniose tegumentar na América do Sul, podendo levar também à grave forma mucocutânea. Apesar da existência de uma via de RNA de interferência (RNAi) funcional já ter sido demonstrada em L. braziliensis, a possível relação desse mecanismo de regulação da expressão gênica na interação parasito-hospedeiro durante o processo de infecção ainda não foi avaliado. Assim, o objetivo geral deste projeto de pesquisa é investigar o possível papel de um componente central da via de RNAi, a proteína argonauta, na infecção por L. braziliensis. Para isso, a linhagem nocaute para LbrAGO1 gerada a partir de CRISPR-Cas9 será utilizada na infecção in vitro de macrófagos humanos e o conteúdo de RNA dos macrófagos infectados será analisado via RNA-Seq duplo. Como a via de RNAi se articula em torno de RNAs não codificadores (ncRNAs), estes serão destacados dentre os genes diferencialmente expressos e a possível modulação de mRNAs do hospedeiro será avaliada. Dados já disponíveis mostram que o transcrito de LbrAGO1 está entre os genes mais expressos independente do estágio de desenvolvimento, o que permite especular que a via de RNAi possa ter também participação na infecção. Em uma análise preliminar in silico, nós identificamos um conjunto de 211 ncRNAs que podem estar sendo carreados pela argonauta e transferidos via exossomo para o hospedeiro, indicando que, de fato, ncRNAs podem estar envolvidos na interação parasito-hospedeiro. Este estudo visa contribuir para a compreensão da via de RNAi em L. braziliensis, assim como para o aprofundamento do conhecimento acerca dos mecanismos moleculares da infecção nesta espécie, podendo apontar possíveis alvos terapêuticos.