Bolsa 98/14569-3 - Hidrólise, Fosfolipases

Processo:	98/14569-3
Modalidade de apoio:	Bolsas no Brasil - Mestrado
Data de Início da vigência:	01 de março de 1999
Data de Término da vigência:	28 de fevereiro de 2001
Área de conhecimento:	Ciências Biológicas - Bioquímica

Pesquisador responsável:	Richard John Ward
Beneficiário:	Juliana Martha Sá

Instituição Sede:	Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil

Vinculado ao auxílio:	96/11165-3 - Investigação da relação entre estrutura e função em fosfolipase lisina 49, AP.JP


Assunto(s):	Hidrólise Fosfolipases Engenharia de proteínas Mutagênese
Palavra(s)-Chave do Pesquisador:	Engenharia De Proteinas \| Espectrofluorescencia \| Estrutura E Funcao De Proteina \| Fosfolipases \| Interacao Proteina Membrana \| Mutagense Sitio Dirigida
Resumo O hidrolise de fosfolipídeos em membranas biológicas por fosfolipases A2 (PLA2) envolve Ca2+ como cofator. Na subfamília de PLA2-Lys49, um Asp no posição 49 e substituído por Lys abolindo a ligação d o cofator Ca2+. Apesar da falta de atividade catalítica, as PLA2-Lys49 danificam membranas por um mecanismo Ca2+-independente. Analise dos seqüências de PLA2-Lys49 em comparação dos PLA2-Asp49 tem identificado substituições específicos na bolsa hidrofóbica que forma o sub-sítio de ligação de fosfolipídeo. Pretendemos utilizar a técnica de mutagênese sítio-dirigida para gerar mutações neste região da proteína, e avaliar o efeito na ligação de lipídeos usando técnicas de espetro-fluorescência. Os resultados indicará se mudanças na constante de dissociação do lipídeo é corelada com atividade Ca2+-independente. (AU)

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Publicações científicas (4)

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

CHIOATO‚ L.; DE OLIVEIRA‚ A.H.C.; RULLER‚ R.; SÁ‚ J.M.; WARD‚ R.J.. Distinct sites for myotoxic and membrane-damaging activities in the C-terminal region of a Lys49-phospholipase A2.. Biochemical Journal, v. 366, n. Pt 3, p. 971, 2002. (96/11165-3, 98/14686-0, 98/14569-3, 98/14568-7, 97/14370-0)

SÁ‚ J.M.; CHIOATO‚ L.; FERREIRA‚ T.L.; DE OLIVEIRA‚ A.H.C.; RULLER‚ R.; ROSA‚ J.C.; GREENE‚ L.J.; WARD‚ R.J.. Topology of the substrate-binding site of a Lys49-phospholipase A2 influences Ca2+-independent membrane-damaging activity. Biochemical Journal, v. 382, n. Pt 1, p. 191, 2004. (96/11165-3, 00/11165-0, 98/14686-0, 01/06388-3, 98/14569-3)

WARD‚ R.J.; CHIOATO‚ L.; DE OLIVEIRA‚ A.H.C.; RULLER‚ R.; SÁ‚ J.M.. Active-site mutagenesis of a Lys49-phospholipase A2: biological and membrane-disrupting activities in the absence of catalysis.. Biochemical Journal, v. 362, n. Pt 1, p. 89, 2002. (96/11165-3, 98/14686-0, 98/14569-3, 98/14568-7, 97/14370-0)

RULLER‚ R.; ARAGAO‚ EA; CHIOATO‚ L.; FERREIRA‚ T.L.; DE OLIVEIRA‚ AHC; SA‚ JM; WARD‚ RJ. A predominant role for hydrogen bonding in the stability of the homodimer of bothropstoxin-I‚ A lysine 49-phospholipase A₂. Biochimie, v. 87, n. 11, p. 993-1003, 2005. (96/11165-3, 00/11165-0, 98/14686-0, 01/06388-3, 98/14569-3)

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