Generation of hyperfunctional recombinant human factor IX variants expressed in human cell line SK-Hep-1

Autor(es)

Sousa Bomfim, Aline ^{[1, 2, 3]} ; Correa de Freitas, Marcela Cristina ^[2] ; Picanco Castro, Virginia ^[2] ; Abreu Soares Neto, Mario ^[2] ; Padua, Ricardo ^[4] ; Covas, Dimas Tadeu ^{[5, 2]} ; Sousa Russo, Elisa Maria ^{[1, 2]}

Afiliação do(s) autor(es)

^[1] Univ Sao Paulo, Sch Pharmaceut Sci Ribeira Preto, Dept Clin Toxicol & Food Sci Anal, Sao Paulo - Brazil

^[2] Univ Sao Paulo, Ctr Cell Based Therapy & Reg Blood Ctr, Biotechnol Lab, Sao Paulo - Brazil

^[3] Univ Sao Paulo, Dept Clin Toxicol & Food Sci Anal, Sch Pharmaceut Sci Ribeirao Preto, Cafe Ave, Block R, Room 7, BR-14040903 Ribeirao Preto, SP - Brazil

^[4] Univ Sao Paulo, Dept Chem & Phys, Sch Pharmaceut Sci Ribeirao Preto, Sao Paulo - Brazil

^[5] Univ Sao Paulo, Dept Clin Med, Fac Med Ribeirao Preto, Sao Paulo - Brazil

• Tipo de documento: Artigo Científico
• Fonte: Biotechnology Letters; v. 43, n. 1, p. 143-152, JAN 2021.
• Citações Web of Science: 0

Resumo

Objective To develop recombinant factor IX (FIX) variants with augmented clotting activity. Results We generated three new variants, FIX-YKALW, FIX-ALL and FIX-LLW, expressed in SK-Hep-1 cells and characterized in vitro and in vivo. FIX-YKALW showed the highest antigen expression level among the variants (2.17 mu g(-mL)), followed by FIX-LLW (1.5 mu g(-mL)) and FIX-ALL (0.9 mu g(-mL)). The expression level of FIX variants was two-five fold lower than FIX-wild-type (FIX-WT) (4.37 mu g(-mL)). However, the biological activities of FIX variants were 15-31 times greater than FIX-WT in the chromogenic assay. Moreover, the new variants FIX-YKALW, FIX-LLW and FIX-ALL also presented higher specific activity than FIX-WT (17, 20 and 29-fold higher, respectively). FIX variants demonstrated a better clotting time than FIX-WT. In hemophilia B mice, we observed that FIX-YKALW promoted hemostatic protection. Conclusion We have developed three improved FIX proteins with potential for use in protein replacement therapy for hemophilia B. (AU)

• Processo FAPESP: 17/25364-6 - Mapeamento das Redes de Cooperação e de Tendências Tecnológicas em Patentes de Biotecnologia por meio da Análise de Redes Sociais
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