| Texto completo | |
| Autor(es): |
de Souza, Angelica R.
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de Araujo, Gabriela C.
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Zanphorlin, Leticia M.
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Ruller, Roberto
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Franco, Fernanda C.
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Torres, Fernando A. G.
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Mertens, Jeffrey A.
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Bowman, Michael J.
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Gomes, Eleni
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Da Silva, Roberto
Número total de Autores: 10
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| Tipo de documento: | Artigo Científico |
| Fonte: | International Journal of Biological Macromolecules; v. 93, p. 7-pg., 2016-12-01. |
| Resumo | |
The GH10 endo-xylanase from Thermoascus aurantiacus CBMAI 756 (XynA) is industrially attractive due to its considerable thermostability and high specific activity. Considering the possibility of a further improvement in thermostability, eleven mutants were created in the present study via site-directed mutagenesis using XynA as a template. XynA and its mutants were successfully overexpressed in Escherichia coli Rosetta-gami DE3 and purified, exhibiting maximum xylanolytic activity at pH 5 and 65 degrees C. Three of the eleven mutants, Q158R, H209N, and N257D, demonstrated increased thermostability relative to the wild type at 70 degrees C and 75 C.Q158R and N257D were stable in the pH range 5.0-10.0, while WT and H209N were stable from pH 8-10. CD analysis demonstrated that the WT and the three mutant enzymes were expressed in a folded form. H209N was the most thermostable mutant, showing a Tm of 71.3 degrees C. Molecular dynamics modeling analyses suggest that the increase in H209N thermostability may beattributed to a higher number of short helices and salt bridges, which displayed a positive charge in the catalytic core, stabilizing its tertiary structure. (C) 2016 Elsevier B.V. All rights reserved. (AU) | |
| Processo FAPESP: | 14/04272-8 - Aumento da termoestabilidade de uma xilanase termoestável de Thermoascus aurantiacus (GH-10)através de engenharia de proteína, por epPCR e mutação sítio dirigida |
| Beneficiário: | Angelica Rodrigues de Souza |
| Modalidade de apoio: | Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Doutorado |
| Processo FAPESP: | 10/12624-0 - Aplicação de métodos físico-químicos e enzimáticos na sacarificação do bagaço de cana: estudos de microrganismos, processos fermentativos relacionados e métodos de hidrólise |
| Beneficiário: | Eleni Gomes |
| Modalidade de apoio: | Auxílio à Pesquisa - Temático |
| Processo FAPESP: | 11/17658-3 - Estudos computacionais em enovelamento de proteínas e aplicações no estudo de enzimas envolvidas na geração de bioetanol |
| Beneficiário: | Vitor Barbanti Pereira Leite |
| Modalidade de apoio: | Auxílio à Pesquisa - Regular |
| Processo FAPESP: | 14/02080-4 - Produção de etanol de bagaço de cana-de-açúcar pré-tratado com ozônio: estudo de inibidores, fermentação e leveduras industriais |
| Beneficiário: | Roberto da Silva |
| Modalidade de apoio: | Auxílio à Pesquisa - Programa BIOEN - Regular |
| Processo FAPESP: | 02/08355-8 - Melhoramento da termoestabilidade da glucoamilase de aspergillus awamori pela tecnica de pcr mutagenico, purificacao e caracterizacao da enzima. |
| Beneficiário: | Roberto da Silva |
| Modalidade de apoio: | Auxílio à Pesquisa - Regular |