Participação da proteína tirosina quinase Src e do óxido nítrico nas vias de sinalização celular estimuladas por estrógeno em linhagens de tumores humanos de mama

Resumo

Src quinase é uma proteína tirosina quinase citoplasmática que tem papel fundamental em inúmeros processos celulares como proliferação, migração e transformação. A fosforilação em tirosina associada a modificações pós-tradução de natureza redox (ex: nitrosilação, oxidação, etc.) determinam as vias de sinalização celular mediadas e/ou facilitadas por Src quinase. Nosso grupo descreveu recentemente a S-nitrosilação de Src em fibroblastos de camundongo e em células de carcinoma mamário humano, MCF-7, por fontes exógenas e endógenas de óxido nítrico (NO). O NO tem uma função central na tumorigênese, particularmente no que concerne à capacidade de invasão e metástase tumorais. Células MCF-7 são responsivas a estrógenos por possuírem receptor de estrógeno (ER). Os estrógenos são moléculas importantes que regulam vários processos fisiológicos, incluindo crescimento, proliferação e diferenciação celular, além da migração e formação de novos vasos sanguíneos; entretanto, também está envolvido em processos patológicos, como o câncer de mama. Várias evidências indicam que em células MCF-7 Src quinase ativa a fosfatidilinositol 3 quinase (PI3K) cujo principal alvo é a proteína Akt, que leva à rápida ativação da enzima óxido nítrico sintase endotelial (eNOS), responsável pela liberação NO no lúmen vascular. Não se conhece a relação entre estas duas vias importantes de sinalização celular associadas à progressão destes tumores. Para realizar este objetivo iremos caracterizar os componentes da via de sinalização envolvendo a S-nitrosilação de Src em células MCF-7. Para tanto, nós pretendemos clonar, expressar e purificar Src quinase recombinante com um "tag" de 6 histidinas (6xHis); o "tag" de histidina tornará possível a purificação de um complexo multiprotéico, 6xHis-Src-proteínas, após estímulo com estrógeno (17b-estradiol). Este complexo multiprotéico será estudado através das técnicas de Western Blot/Imunoprecipitação e Espectrometria de Massas. (AU)