Avaliação do envolvimento da GTPase Ras de Paracoccidioides brasiliensis no termo-dimorfismo do fungo e durante o estresse oxidativo e nitrosativo

Resumo

Paracoccidioides brasiliensis, fungo dimórfico termo-dependente, é o agente etiológico da micose sistêmica mais comum na América Latina, paracoccidioidomicose (PCM). A infecção pelo fungo ocorre por inalação de conídeos presentes no meio ambiente. Para o desenvolvimento da doença é imprescindível que os conídeos alojados nos alvéolos pulmonares passem para fase leveduriforme, evento depende do aumento de temperatura. Este fungo age como patógeno intracelular facultativo capaz de sobreviver e replicar dentro de macrófagos não ativados. Esta habilidade de evadir a resposta imune inata do hospedeiro e assim causar doença é particularmente devido a sua capacidade para responder e sobreviver ao estresse nitrosativo e oxidativo causado pelas células do sistema imune, particularmente macrófagos alveolares. Entretanto, nada se conhece sobre a regulação de vias de transdução de sinal associadas a esta resistência, possivelmente desencadeadas pelas espécies reativas de oxigênio (ROS) e nitrogênio (RNS) geradas pelo hospedeiro e que irão atuar sobre este micro-organismo. Dentre as proteínas que participam das vias de sinalização celular destaca-se Ras, uma GTPase com importante papel em diferentes processos celulares, como controle das mudanças morfológicas, proliferação celular e resposta a estresse. Em P. brasiliensis foram identificados duas isoformas desta proteína, Ras1 e Ras2, e que são homólogas a outros fungos. Atualmente existem evidências experimentais da participação de radicais livres e outras espécies reativas nas vias de transdução de sinal. Em condição redox, Ras pode sofrer modificações pós-traducionais de caráter reversível (S-nitrosilação) capaz de ativar e modular esta molécula. Desta forma, este projeto propõe avaliar o processo de ativação da proteína Ras de P. brasiliensis que ocorrem no fungo após exposição a diferentes concentrações de ROS e/ou RNS. Para tanto, será produzida uma sonda para verificar a atividade de Ras (RBD-GST). O desenvolvimento deste projeto certamente levará a compreensão da relação parasito-hospedeiro sob uma nova perspectiva, nesta e provavelmente em outras micoses sistêmicas. (AU)