Influência de hormônios esteroidais nos níveis de expressão e localização das ADAMTS-1, 4 e 9 em células derivadas de tumores de ovário

Resumo

Os hormônios sexuais modulam diversas atividades no câncer, influenciando desde o processo de tumorigênese, crescimento celular e metástase. As ADAMTS´s (a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs ou adamalysin-thrombospondin) são proteases secretadas e que estão envolvidas em funções como o processamento de colágeno em procolágeno N-proteinase, clivagem dos proteoglicanos da matriz e angiogênese. Nosso objetivo é avaliar se os níveis de expressão das ADAMTS 1, 4 e 9 (mRNA e proteína)e sua localização subcelular são alterados na presença dos hormônios sexuais estrógeno, progesterona e testosterona em linhagens celulares derivadas de tumores de ovário com diferentes graus de malignidade, e verificar se na presença destes hormônios as linhagens aumentam ou diminuem sua capacidade de invasão. As linhagens NIH-OVCAR-3 e ES-2, após etapas de proliferação e preparação adequada, serão tratadas com concentrações dos hormônios Progesterona, Estrógeno ou Testosterona. Os níveis de ADAMTS (mRNA) serão analisados por qPCR. Os valores derivados da fluorescência obtida por qPCR serão submetidos à análise estatística com Anova e as diferenças serão consideradas estatisticamente significantes para pd 0,05. Os níves de ADAMTS (proteína), obtidos do lisado total, serão analisados por imunoblot. Os valores obtidos da área de cada uma das bandas serão submetidos à mesma análise estatística descrita anteriormente. Para a identificação subcelular das proteases nas linhagens celulares será utilizada a técnica de imunofluorêscencia.Para a avaliar se os hormônios esteroidais levam a um aumento ou diminuição da capacidade de invasão das linhagens de câncer de ovário será realizado um ensaio de invasão, onde as células serão colocadas frente a cada um dos hormônios de forma individual e esta será comparada a uma amostra controle não tratada com o hormônios. (AU)