Caracterização dos efeitos de uma Fosfolipase A2 (MT-III) de veneno ofídico em células de músculo liso vascular em cultura: formação de células espumosas e mecanismos envolvidos

Resumo

As fosfolipases A2 secretadas (sFLA2s) são abundantes nos venenos de serpentes do gênero Bothrops e apresentam homologia estrutural e funcional com as sFLA2s de mamíferos, do mesmo grupo (GIIA), cujos níveis estão aumentados em doenças inflamatórias, como a aterosclerose. Neste contexto, as enzimas ofídicas representam uma ferramenta valiosa para o estudo das ações das sFLA2s inflamatórias de mamíferos. A MT-III, uma GIIA-Asp49-sFLA2 isolada do veneno da serpente Bothrops asper, apresenta ação inflamatória marcante, em modelos experimentais in vivo e in vitro. Recentemente, demonstramos que a MT-III induziu a formação de macrófagos espumosos, caracterizados pelo acúmulo de corpúsculos lipídicos (CLs) e a expressão da PLIN2, proteína relacionada à formação desses corpúsculos. No entanto, não são conhecidos os efeitos desencadeados pela MT-III, nem pelas sFLA2s de mamíferos, em outros tipos celulares capazes de acumular lipídios e transformarem-se me células espumosas, como as células de músculo liso vascular (CMLVs), que são relevantes em doenças inflamatórias relacionadas ao desequilíbrio lipídico, como a aterosclerose. Este estudo visa investigar os efeitos da MT-III em CMLVs, com ênfase na formação de CLs e os mecanismos envolvidos nesse efeito. Para tanto, serão avaliados os efeitos da MT-III quanto à: i) formação de corpúsculos lipídicos; ii) importância da atividade catalítica da MT-III e do fenótipo sintético e/ou contrátil das CMLVs para a formação de CLs; iii) distribuição intracelular e expressão protéica das perilipina 2 (PLIN2) e perilipina 3 (PLIN3); iv) expressão protéica do receptor scavenger CD36 e do SR-A1 e à sua participação na formação de CLs; v) expressão e ativação dos receptores PPAR- ³ e -²/´ e à sua participação na formação de CLs; vi) participação das enzimas diacilglicerol aciltransferase (DGAT) e acil-coenzimaA:colesterol aciltransferase (ACAT) na formação de CLs; vii) expressão das ciclooxigenases 1 e 2, liberação de PGE2 e à distribuição intracelular destes elementos em relação ao CL; viii) liberação de TNF-±, IL-1, IL-6, MCP-1 e fractalcina; ix) expressão das proteínas de efluxo lipídico ABCA1 e ABCG1e x) internalização da MT-III em CMLVs. Este trabalho deverá ampliar o conhecimento das ações desencadeadas por sFLA2s em processos inflamatórios e especialmente aqueles associados ao desequilíbrio lipídico, com o potencial de evidenciar novos alvos terapêuticos em doenças em que esse desequilíbrio seja um fator preponderante. Ainda, este estudo contribuirá para o melhor conhecimento da fisiopatologia da reação inflamatória causada pelo veneno botrópico. (AU)