Caracterização do papel das enzimas envolvidas em modificações pós-traducionais que modulam a estabilidade e translocação proteica durante a Transição Epitélial-Mesenquimal

Resumo

Câncer se destaca como um conjunto de doenças multifatoriais que tem em comum o crescimento desordenado de células que invadem tecidos e órgãos, dando origem às metástases. Durante a metástase, ocorrem inúmeras alterações nas células que modificam a estabilidade proteica e/ou promovem sua translocação subcelular, incluindo o envio de proteínas para degradação no proteassoma, o transporte de proteínas para a membrana, alterações no citoesqueleto, entre outras. Sendo assim, no processo de progressão do câncer e mais especificamente durante a metástase, vários pontos de controle relacionados à degradação e translocação de proteínas entre sub-compartimentos celulares são esperados. Em todas as células, a modulação de processos e alterações disparadas por cascatas de sinalização também dependem de mecanismos finamente controlados por modificações pós-traducionais. Recentemente, alguns mecanismos vêm ganhando bastante atenção com relação à metástase, por se basearem no endereçamento e degradação de moléculas sinalizadoras proteicas, como ocorre no sistema ubiquitina-proteassoma. Durante estes processos, proteínas alvo são marcadas pós-traducionalmente através da ubiquitinação, ou similares a ubiquitina, como a sumoilação e nedilação, por enzimas específicas e que participam, portanto, no controle fino das vias em que estão envolvidas. No presente projeto será avaliada a influência de enzimas e mecanismos de ubiquitinação/de-ubiquitinação e modificações correlatas na regulação de processos de transição epitélial-mesenquimal (EMT). Serão utilizados como modelos linhagens celulares de câncer de mama, que serão induzidas à EMT em resposta a fatores de crescimento, simulando a etapa crítica de desencadeamento da metástase. A partir de resultados obtidos em nosso laboratório, durante a indução da EMT, enzimas envolvidas nas vias de ubiquitinação, sumoilação e nedilação serão moduladas através de inibidores químicos seletivos ou RNA de interferência, de maneira avaliar essa regulação durante a comunicação de vias que regem os processos da EMT. Serão utilizados ainda métodos de proteômica dirigida para quantificar e também validar as alterações moleculares observadas. Como resultado, esperamos identificar enzimas chaves envolvidas nos processos de ubiquitinação, sumoilação ou nedilação e que participam nos processos de progressão tumoral, contribuindo assim com a identificação de potenciais novos alvos para terapia do câncer metastático. (AU)