Influência do laser de baixa intensidade nos neurônios: um estudo eletrofisiológico para ajudar a compreender os efeitos analgésicos do infravermelho na neuropatia diabética

Resumo

Aproximadamente 50% dos pacientes diabéticos desenvolvem neuropatia periférica com complicações irreversíveis no sistema nervoso periférico. A hiperglicemia é a principal causa do estresse oxidativo e promove um ambiente que pode danificar os nervos periféricos e vias de sinalização ligadas à ele. Os nociceptores podem ser afetados seletivamente pela terapia laser de baixa intensidade (LLLT), uma vez que já foi proposto que este efeito sustente a analgesia promovida pela LLLT no tratamento da dor aguda e crônica. Em estudos de cultura de células usando GRD de rato, os comprimentos de onda de 830, 808 e 650 nm levaram às alterações neurofisiológicas reversíveis do potencial de membrana mitocondrial (MMP). No entanto, nenhum estudo mostrou o efeito direto da irradiação por laser infravermelho em neurônios sensibilizados, em uma condição de estresse oxidativo e hiperglicemia, que imita uma situação de neuropatia diabética. Assim, o objetivo geral deste estudo é compreender a influência direta da LLLT na atividade elétrica de neurônios HT22 do hipocampo de camundongo e GRD de rato. Em primeiro lugar, usaremos culturas de células imortalizadas de neurônios do hipocampo de camundongo HT22 e após os primeiros testes, coletaremos os GRD de ratos machos LEW/HsdUnib (Lewis) isogênicos (4 semanas de idade). Os neurônios HT22 e os neurônios de GRD serão expostos à irradiação com laser infravermelho AsGa (904 nm), usando um dispositivo laser Endophoton LLT-1307 (KLD Biosystems® - Brasil), classe IIIB; frequência contínua; energia 2,03 joule; 29 segundos; 70 mW de potência; feixe de saída de 0,001 cm²; irradiância de 7.000 mW/cm². Durante a irradiação com o laser, os neurônios serão submetidos a registros eletrofisiológicos do potencial de membrana. Os neurônios serão transferidos para uma câmara de gravação através da qual fluído cerebrospinal artificial oxigenado (ACSF) será constantemente perfundido (2 mL/min) à temperatura ambiente. Também investigaremos o MMP usando éster metílico de tetrametil rodamina (TMRM - Invitrogen/Molecular Probes). Os neurônios HT22 e DRG, expostos à LLLT, serão corados pela solução Hoechst Stain (Sigma-Aldrich). As células também serão tratadas com FluoVolt em solução fisiológica suplementada com o corante e com o PowerLoad Concentrate. O PowerLoad Concentrate (um componente do FluoVolt Kit) é uma formulação otimizada de polióis tensoativos plurônicos, que ajudam a solubilizar o corante. Estes experimentos ajudarão a compreender os possíveis efeitos da LLLT na atividade elétrica dos neurônios, uma vez que acreditamos em um "efeito hiperpolarizante" promovido pela irradiação com laser infravermelho. Este efeito pode estar relacionado à analgesia promovida pela LLLT na dor neuropática diabética. (AU)