Clonagen e caracterização de 10 transportadores da barreira hemato-encefálica humana

Resumo

As drogas direcionadas ao sistema nervoso central frequentemente falham em ensaios clínicos devido ao seu mau transporte para o cérebro. Isto é devido à importação ineficiente de drogas através da barreira hemato-encefálica. Neste projeto, pretendemos usar a levedura Saccharomyces cerevisiae como uma plataforma para estudar o transporte de produtos químicos para dentro e fora das células. Para esse fim, o aluno de iniciação científica contribuirá para a criação de uma coleção de plasmídeos que codificam transportadores de membrana plasmática humana com marcação fluorescente. Estes serão transformados em estirpes de levedura, onde a via de síntese nativa de ergosterol é substituída por uma via sintética de síntese de colesterol humano. Temos resultados preliminares promissores que indicam que as cepas com colesterol nas membranas plasmáticas têm a capacidade de incorporar eficientemente proteínas trans-membranas humanas. Portanto, as cepas com uma membrana plasmática humanizada podem ser hospedeiras para a expressão heteróloga de transportadores de barreiras hematoencefálicas. Uma vez que as cepas de leveduras que expressam os transportadores humanos forem construídas, o aluno avaliará a localização subcelular de cada transportador e realizará ensaios funcionais para confirmar a especificidade do substrato para cada transportador.