Análise da Expressão de Proteínas Reguladas pelo Fator de Transcrição Brn-2 em Células Tratadas com Peptídeos Derivados do Domínio POU da Proteína Brn-2 e Determinação da Internalização e Localização Celular desses Peptídeos

Resumo

O fator de transcrição Brn-2 é expresso em células de melanócitos e superexpresso em melanoma. O aumento na expressão desta proteína está relacionado com a formação e progressão tumoral e também com o desenvolvimento de metástase. As três principais vias de sinalização intracelular que estão envolvidas com a formação de melanoma, as vias MAPK/BRAF, WntD²-catenina e PI3K/Akt Brn-2 regulam a expressão de Brn-2. A ativação constitutiva de BRAF induz o aumento na expressão de Brn-2 que induz aumento na expressão de MITF, que uma proteína responsável pela melanogênese. O aumento na expressão de MITF está relacionado com a sobrevivência da célula por regular a expressão da proteína anti-apoptótica Bcl2.Entretanto, o fator de transcrição Brn-2 quando superexpresso de maneira independente de BRAF também pode subregular os níveis de MITF, suprimindo o fenótipo de diferenciação melanocítico e consequentemente promovendo a metástase tumoral. Células de melanoma com menores níveis de MITF são mais invasivas, claramente implicando Brn-2 na tumorigenicidade do melanoma e na formação de metástases. Brn-2 também regula negativamente a expressão de PDE5A, levando a um aumento de Ca+2 intracelular, estimulando a invasão celular. Além disso, Brn-2 tem sido implicado na regulação da via de sinalização NOTCH, outra via que está diretamente relacionada com progressão do melanoma. Em melanoma, Brn-2 tem sido identificado como repressor transcricional da glicoproteína de superfície celular T-caderina (caderina 13). Essa proteína tem sido identificada como supressora tumoral, pois sua expressão é significantemente diminuída em vários tipos de câncer. Estudos recentes em nosso laboratório demonstraram que peptídeos derivados do domínio de ligação ao DNA do fator de transcrição Brn-2 possuem efeitos biológicos importantes. Três peptídeos mostraram atividade antitumoral, sendo que o peptídeo R18H induz apoptose em células tratadas. Já outros quatro peptídeos testados não apresentaram efeito antitumoral, entretanto, mostraram efeito importante na inibição da migração celular e aumento nos níveis de cálcio intracelular, e possivelmente também interferir nos mecanismos de invasão e metástase.Peptídeos derivados de Brn-2 poderiam ter diversos efeitos inibitórios para o desenvolvimento do melanoma, inclusive competir com o sítio de ligação no DNA do fator de transcrição Brn-2. Com isso, podemos observar a necessidade de estudar mecanismos de internalização celular e localização celular desses peptídeos. Além disso, propomos que esses peptídeos poderiam estar alterando a expressão gênica das proteínas Brn-2, MITF, T- Caderina (caderina 13), PTEN, NOTCH1, JAG2, DLL1, Bax e Bcl2. Alterações nos níveis dessas proteínas serão analisadas por Western Blotting em células tratadas com os peptídeos. Além disso, a interferência na expressão gênica dos peptídeos derivados do fator de transcrição Brn-2 será avaliada pela técnica de RNAseq utilizando a plataforma Ilumina. Esse estudo será importante para esses peptídeos possam ser utilizados para o desenvolvimento de drogas promissoras contra o câncer. (AU)