Explorando o papel das proteínas associadas à cromatina detectadas no Trypanosoma cruzi

Resumo

Para expandir o conhecimento sobre a regulação da cromatina do Trypanosoma cruzi, propusemos aproveitar metodologias de ponta que foram desenvolvidas para recuperar proteínas associadas à um determinado locus. Neste projeto de mestrado, exploraremos o papel de uma ou duas proteínas associadas à cromatina que serão detectadas através da metodologia mencionada acima. Idealmente, serão selecionadas as proteínas que foram encontradas de modo enriquecido em mais de um locus gênico. A função desses alvos serão exploradas através do sistema CRISPR/Cas9 para geração de parasitas Knouckouts (KO) e proteínas marcadas. Os parasitas KO serão avaliados da seguinte maneira: i. Quanto à capacidade de proliferação e diferenciação em tripomastigotas metacíclicos; e ii. Em relação a acessibilidade de interrupção gênica da cromatina e a taxa transcrição dos locus associados. Parasitas que expressam as proteínas marcadas serão utilizados para avaliarmos a localização celular dessas proteínas e identificarmos suas interações com outros componentes celulares utilizando a técnica de imunoprecipitação (IP). (AU)