O papel da crotonilação de histonas em células tronco intestinais

Resumo

A regulação da proliferação e diferenciação das células tronco intestinais (ISCs) é crucial para a homeostase intestinal. Esses processos são, em parte, regulados por sinais da microbiota, destacando-se os Ácidos Graxos de Cadeia Curta (AGCCs), os quais induzem modificações pós-traducionais (PTMs) incluindo acetilação e crotonilação de histonas, importantes na regulação da expressão gênica. Neste estudo analisaremos o padrão de acilação (acetilação e crotonilação) de histonas das ISCs colônicas em contexto fisiológico. Além disso, investigaremos a relevância dessas PTMs para a expressão gênica e funções das ISCs. Para tanto, avaliaremos a acilação de histonas das ISCs colônicas de animais C57/BL6 mantidos em condições que alteram a microbiota e a produção endógena de AGCCs incluindo dietas com ou sem fibras, e tratamento ou não com antibióticos. Detectaremos e quantificaremos as PTMs nessas condições através de citometria de fluxo, Western Blot e imunofluorescência (IF). Analisaremos o impacto das acilações na expressão gênica de ISCs através de RNA-seq e de ChIP-qPCR. Estudaremos o impacto funcional das PTMs nas ISCs comparando sua proliferação por EdU, acilações por IF e sua capacidade de diferenciação nos diferentes tipos celulares que compõem o epitélio intestinal. Essas análises serão complementadas com o uso de organóides derivados do cólon de animais controles, incubados ou não com indutores da crotonilação e acetilação. Com este projeto, pretendemos avançar no conhecimento a respeito da regulação das ISCs pela microbiota, o que tem relevância não apenas na homeostase, mas também para a regeneração tecidual após dano e no desenvolvimento de Câncer intestinal. (AU)