Papel dos metabólitos derivados da microbiota, ácidos graxos de cadeia curta, sobre as células linfoides inatas

Resumo

As células linfoides inatas (ILC) são uma população heterogênea de células que, apesar de suas similaridades morfológicas e efetoras com linfócitos T, não expressam receptores de células T e atuam na primeira linha de defesa. Estas células são encontradas ao longo da mucosa intestinal e desempenham um papel fundamental nas interações diretas e indiretas entre a microbiota e as células hospedeiras. Os metabólitos bacterianos, os ácidos graxos de cadeia curta (AGCCs), são produzidos durante a fermentação da fibra no intestino. Eles são uma conexão importante entre a microbiota e o hospedeiro, afetando o desenvolvimento e a ativação do sistema imunológico. Nossa hipótese é que as ILCs são alvos principais dos AGCCs. Neste contexto, pretendemos analisar se os AGCCs, direta ou indiretamente (apesar de seu impacto sobre as células epiteliais intestinais), influenciam a maturação e a função das ILCs, particularmente aquelas do grupo 3. Para isso, testaremos os efeitos diretos dos AGCCs sobre as ILCs totais e ILC3 da lâmina própria do cólon. Adicionalmente, pretendemos analisar o efeito indireto dos AGCC sobre a ativação dessas células via epitélio. Para tal, vamos co-cultivar organoides intestinais com ILC3 ou seus precursores. Os organoides intestinais serão previamente tratados com AGCCs e depois incubados com as ILCs. A produção de citocinas (IL-17 e IL-22) por essas células será analisada nesses experimentos. Para determinar os mecanismos moleculares pelos quais os AGCCs atuam nas ILCs, avaliaremos a expressão de alvos moleculares desses metabólitos bacterianos por qPCR e usaremos agonistas sintéticos específicos dessas vias. Além disso, analisaremos se o efeito protetor dos AGCCs na infecção por C. difficile depende das ILCs. Para isso, usaremos Rag2 deficiente (que não possui linfócitos T/B, mas possuem ILCs intactas) e Rag2/camundongos knockout com cadeia dupla (não possui linfócitos T/B e ILCs) e um modelo de camundongo imunocompetente que não possui ILC3. (AU)