Investigação de vias de sinalização e processos biológicos associados à proteína ANKHD1 em Câncer de Estômago

Resumo

O câncer de estômago é o quinto tipo de câncer mais diagnosticado e a quarta principal causa de morte por câncer no mundo, sendo que pacientes com adenocarcinoma gástrico em estágio clínico avançado (IV) apresentam sobrevida média entre 9 e 10 meses. Assim, apesar dos avanços quanto à compreensão de sua biologia, torna-se evidente a relevância da identificação de novos marcadores moleculares que possam ser úteis para o manejo clínico e tratamento de pacientes com câncer de estômago. Nesse sentido, a partir do estabelecimento de diversas interações proteicas, a proteína Ankyrin repeat and KH domain-containing 1, ANKHD1, tem sido demonstrada como reguladora de vias de sinalização e processos celulares relevantes para a biologia do câncer, destacando-se a sua interação com a proteína Yes-associated protein 1, YAP1, uma efetora da via de sinalização Hippo. Recentemente, de acordo com a expressão de YAP1 e sua atividade enquanto oncogene ou supressor de tumor, um estudo pan-câncer propôs uma nova classificação binária dos diferentes tipos tumorais em YAPon e YAPoff. Nesse contexto, destaca-se que 71% dos pacientes da coorte do TCGA de adenocarcinoma gástrico apresentam alterações em genes envolvidos na via de sinalização Hippo, sendo este, um tipo de tumor YAPon. Assim, em vista da nova divisão pan-câncer proposta, baseada na expressão e função de um interator bem caracterizado da ANKHD1, da ausência de estudos voltados à compreensão do seu papel em uma ampla gama de tipos tumorais e, somando-se aos nossos resultados preliminares que indicaram maior expressão do gene ANKHD1 em tecido de adenocarcinoma gástrico, quando em comparação ao tecido de estômago não tumoral, o presente projeto busca investigar o papel biológico da ANKHD1 e as vias de sinalização a ela associadas, em linhagens celulares de câncer de estômago, um modelo tumoral YAPon. Para isso, serão utilizadas as linhagens celulares HGC-27 e AGS, WT e KO para o gene ANKHD1. As linhagens KO para ANKHD1 serão estabelecidas por meio da tecnologia CRISPR/Cas9. Inicialmente, serão conduzidos ensaios funcionais a fim de se identificar se a proteína ANKHD1 contribui para a manifestação de características malignas nesse modelo experimental. Em seguida, a partir dos desdobramentos desta investigação, caso seja demonstrada a participação da ANKHD1 no fenótipo neoplásico de células de câncer de estômago, será conduzida a análise proteômica do interatoma de ANKHD1 em células WT, a análise transcriptômica de células WT e KO para o gene ANKHD1, seguida de análises de bioinformática, além de ensaios moleculares, a fim de se elucidar os mecanismos associados aos fenótipos observados. (AU)