| Processo: | 12/50562-2 |
| Modalidade de apoio: | Auxílio à Pesquisa - Regular |
| Data de Início da vigência: | 01 de novembro de 2012 |
| Data de Término da vigência: | 30 de abril de 2015 |
| Área do conhecimento: | Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos |
| Pesquisador responsável: | Maria Helena de Souza Goldman |
| Beneficiário: | Maria Helena de Souza Goldman |
| Instituição Sede: | Faculdade de Filosofia, Ciências e Letras de Ribeirão Preto (FFCLRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil |
| Município da Instituição Sede: | Ribeirão Preto |
| Assunto(s): | Ciclo celular Proliferação celular Domínios e motivos de interação entre proteínas Genes cdc Expressão gênica Fosforilação Plantas geneticamente modificadas |
| Palavra(s)-Chave do Pesquisador: | Desenvolvimento Do Pistilo | Estigma/Estilete | Expressao Genica | Inibidor De Ciclo Celular | Interacao Proteina-Proteina | Localizacao Subcelular |
Resumo
Em nosso laboratório, foi identificado o gene SCI1 (Stigma/style Cell cycle Inhibitor 1), capaz de controlar a proliferação celular na porção superior do pistilo (DePaoli et al., 2011), provavelmente por inibir o complexo ciclina-CDK (Cyclin Dependent protein Kinase). Para exercer sua função, a proteína SCI1 precisa interagir com outras proteínas. Em projeto anterior (processo no. 10/50213-2), foram identificadas algumas proteínas candidatas a interação, como a CDKG;2 e duas proteínas da família 14-3-3. Assim, os objetivos deste projeto são: 1) Identificar/confirmar a(s) ciclina(s) que interage(m) com SCI1; 2) Identificar parceiros/substratos da quinase dependente de ciclina (CDKG;2), por °screening"da biblioteca de estigmas/estiletes em vetor de duplo-híbrido; 3) Estudar a hipótese de SCI1 regular a divisão celular, por meio da inibição da CDKG;2. a. Testar a interação por duplo híbrido e/ou BiFC ("Bimolecular Fluorescence Complementation") das proteínas cyclin L e outras ciclinas (cyclin B1 ou cycBn-related) com a CDKG;2; b. Caso alguma ciclina de interação com CDKG;2 seja identificada nos experimentos direcionados (item 3.a) ou no "screening", testar a atividade de CDKG;2 sobre histonas e/ou outro possível substrato identificado no "screening"; c. Se a e b forem positivos, testar a inibição da atividade da CDKG;2 por SCI1; 4) Testar a hipótese de tecido-especificidade na expressão de parceiros de interação de SCI1; 5) Analisar a localização subcelular das proteínas CDKG;2,14-3-3A e 14-3-3D; 6) Realizar experimentos de duplo-híbrido e/ou BiFC para testar a formação de homo e hetero dímeros das 2 proteínas da família 14-3-3 e suas possíveis interações com SCI1; 7) Caracterizar a fosforilação da proteína SCH, pela comparação dos resíduos fosforilados de SCI1 extraída de folhas e pislilos de plantas transgênicas 35Sprom::SCI1-GFP; 8) Confirmar a interação de SCH com novos candidatos de interação, identificados por "pull-down" ou o "screening" de duplo híbrido. (AU)
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