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Effect of melatonin in epithelial mesenchymal transition markers and invasive properties of breast cancer stem cells of canine and human cell lines

Resumo

As células tronco do câncer tem sido associadas à metástase e à resistência terapêutica e podem ser geradas pelo mecanismo de transição epitélio mesenquimal (EMT). Alguns trabalhos sugerem que a melatonina tem ação em células tronco do câncer e no processo de EMT. Os objetivos deste estudo foram avaliar os efeitos do tratamento com melatonina na expressão de marcadores moleculares de células tronco e de EMT, OCT4, E-caderina, N-caderina e vimentina, assim como, na invasibilidade em linhagem de câncer de mama canina e humana. As linhagens MCF-7 e CMT-U229 foram submetidas ao cultivo tridimensional em meio seletivo para células tronco. A confirmação do fenótipo de células tronco (CD44+/CD24baixo/-) foi realizada por citometria de fluxo. A viabilidade celular foi mensurada pelo ensaio colorimétrico MTT. A expressão das proteinas OCT4, E-caderina, N-caderina e vimentina foi avaliada por imunofluorescência e a quantificação foirealizada por densitometria óptica. A análise da migração e invasão celular foi realizada em câmara de Boyden. A citometria de fluxo comprovou o fenótipo de células-tronco. O ensaio MTT mostrou redução da viabilidade celular nas linhagens CMT-U229 e MCF-7, após tratamento com 1mM de melatonina por 24 h. A imunofluorescência evidenciou aumento na expressão da E-caderina em ambas as linhagens. Por outro lado, houve diminuição na expressão das proteínas OCT-4, N-caderina e vimentina na linhagem CMT-U229 e MCF-7 após 24 h de tratamento. O tratamento com melatonina também reduziu a migração e invasão celular em ambas as linhagens quando comparada ao grupo controle. Nossos resultados demonstram que a melatonina apresenta um papel inibitório na viabilidade e invasibilidade celular, bem como, na expressão de proteínas relacionadas com a EMT em células-tronco do câncer de mama, podendo indicar umpotencial papel anti-metastático nesta classe tumoral. (AU)

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