Rearranjos cromossômicos em Trypanosoma cruzi: identificação dos sítios de quebra e mecanismos moleculares envolvidos

• Processo: 06/50058-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2006
• Data de Término da vigência: 31 de março de 2011
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: José Franco da Silveira Filho
• Beneficiário: Fabio Mitsuo Lima
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 02/13705-8 - Bases moleculares da infecção pelo Trypanosoma cruzi: análise dos mecanismos envolvidos e comparação das duas linhagens filogenéticas distintas do parasita, AP.TEM
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Cariotipo Molecular | Organizacao Cromossomica | Rearranjos Cromossomicos | Trypanosoma Cruzi

Resumo

Pretendemos elucidar os mecanismos envolvidos nos rearranjos cromossômicos identificados nos clones das cepas G e CL do protozoário Trypanosoma crua. A primeira parte do projeto consiste na caracterização dos cromossomos e regiões envolvidas no rearranjo. Marcadores genéticos serão hibridizados com as bandas cromossômicas separadas por PFGE. Comparando o cariótipo molecular e o mapa de hibridização da cepa parental e do clone poderemos identificar as bandas cromossômicas que estão participando dos rearranjos cromossômicos. A determinação da disposição dos marcadores genéticos na banda cromossômica será útil para identificar possíveis pontos de quebra ou sitio frágil do cromossomo. Pretendemos obter informações sobre o mecanismo genético (quebra cromossômica e cicatrização; recombinação homóloga ou ectópica) envolvido neste processo. Na segunda parte do projeto tentaremos esclarecer os mecanismos moleculares envolvidos nos rearranjos cromossômicos. É importante identificar os sítios de quebra do cromossomo (possivelmente por DSB, "DNA double strand break") e as seqüências localizadas nesta região. A identificação de proteínas envolvidas no reparo e recombinação das extremidades cromossômicas será realizada por ensaios in vitro. Vamos padronizar o ensaio "DSB-end-joining in vitro assay" visando testar a capacidade do parasita em realizar recombinação não homologa por mecanismo NHEJ (non-homologous end ioining") usando extratos nucleares do parasita e plasmídio contendo o gene ccdB. (AU)