Efeito do IFN-y E TFN-a sobre a expressão gênica de CYBB e processamento de seus transcritos

• Processo: 08/58840-6
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2009
• Data de Término da vigência: 30 de abril de 2013
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Imunologia - Imunologia Aplicada
• Pesquisador responsável: Antonio Condino Neto
• Beneficiário: Josias Soares de Brito
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Doença granulomatosa crônica Superóxidos Expressão gênica NADPH oxidase Fagócitos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Dgc | Fagocitos | Genotipo-Fenotipo | Nadph Oxidase | Splicing | Superoxido

Resumo

O sistema NADPH oxidase fagocítico humano é responsável pela geração de superóxido e outros reativos intermediários do oxigênio, críticos na defesa contra patógenos. Defeitos neste sistema resultam na Doença Granulomatosa Crônica (DGC), cujo quadro clínico caracteriza-se por infecções recorrentes graves, o que demonstra a relevância deste sistema enzimático. Neste projeto propomos aprofundar a pesquisa desenvolvida no decorrer do mestrado (Bolsa FAPESP 06/51005-9), onde foi visto que o tratamento com IFN-g modificou o padrão de expressão do gene CYBB, além de alterar o padrão de marcação dos fatores antinúcleo sobre as proteínas do "spliceossoma". Dessa forma, pretendemos verificar o papel do IFN-Y sobre o processamento da mensagem do gene CYBB por proteínas do "spliciossoma", sua expressão final e ativação do sistema NADPH oxidase. Investigaremos o efeito do IFN-g sobre eventos pré e pós transcricionais relativos à expressão do gene CYBB que codifica o componente gp91-phox em leucócitos de indivíduos normais e de pacientes com DGC ligada ao X, ocasionada por defeitos de "splicing". Analisaremos as mutações localizadas nos introns ou bordas intrônicas, suspeitas de interferir com o a estabilidade do transcrito, processamento da mensagem e exportação nuclear. Analisaremos de forma quantitativa e qualitativa a influência do IFN-y sobre o padrão de expressão do citocromo b558 e sobre as proteínas que compõem o "spliceossomo", o padrão de expressão dos transcritos totais, nucleares e citoplasmáticos do gene CYBB, determinando o nível de expressão dos transcritos dominantes e alternativos, a sequência específica do gene alterado, as sequências dos transcritos principais e alternativos e o processo de maturação do RNAm através da co-localização do domínio de splicing SC35 juntamente com os transcritos do gene CYBB. Finalmente, será verificada a atividade do sistema NADPH oxidase medindo a liberação de superóxido, além da fagocitose antes e após o tratamento com IFN-g. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

FRAZAO, JOSIAS B.; COLOMBO, MARTINO; SIMILLION, CEDRIC; BILICAN, ADEM; KELLER, IRENE; WUETHRICH, DANIEL; ZHU, ZHIQING; OKONIEWSKI, MICHAL J.; BRUGGMANN, REMY; CONDINO-NETO, ANTONIO; et al. Gene expression in chronic granulomatous disease and interferon-gamma receptor-deficient cells treated in vitro with interferon-gamma. Journal of Cellular Biochemistry, v. 120, n. 3, p. 4321-4332, MAR 2019. (08/58840-6, 14/15920-0, 12/51094-2, 13/50460-8)